文档介绍：第三章
培养液的组成和制备
教学目的和要求
掌握培养液的基本成分、血清细胞培养液
掌握平衡盐溶液的组成、作用
内容
培养液的基本成分
平衡盐溶液
天然培养基
合成培养基
血清细胞培养液
无血清细胞培养基
消化液
PH调整液、 L-谷氨酰胺、抗菌素液
一、培养液的基本成分
提供尽可能与体内生活条件相接近的培养环境,包括10个因素:
(1)温度(2)渗透压(3)氢离子浓度(4)其他有机离子(5)主要的代谢物(6)补充的代谢物(7)激素(8)影响细胞代谢的其他因子(9)细胞生长的基质(10)各因素间的相互作用。
早期:大多是完全天然成分:血清、血浆、胚胎浸出液等。接近体内状态,但组成成分复杂,未知因素比较多。
目前:人工培养液。但一般仍加5~10%血清,未知因素仍然存在,尽可能通过人工控制,减少血清等天然成分,作成低血清或无血清培养液。
(一)培养液的组成成分:
1、氨基酸类:只要是必需氨基酸。如:半胱氨酸、酪氨酸等。谷氨酰胺是多数细胞所需求的,提供能源和碳源。
2、维生素类:主要来自血清。
3、盐类:Na+、K+、Mg++、Ca++、Cl-、SO42 -、PO43 -、HCO3-。是调节渗透压的主要成分。
4、葡萄糖:供能,参与三羧酸循环。
5、缓冲系统:多采用磷酸盐缓冲系统。
1/15M Na2 HPO4 / KH2 PO4
Hepes(羟乙基派嗪乙硫磺酸)作为缓冲系统。
一般采用25mmol / L。如果>50mmo l / L。则对有些细胞有毒性。
6、矿物质类:多由血清提供。在低或无血清时,需补充Fe、Cu、 Ze、Se和稀有元素。
7、有机补充物
如:核甘酸、三羧酸循环中间产物、丙酮酸盐、类脂化合物等。在低血清中要加以补充。
8、激素类:
不同的激素对细胞存活与生长显示有不同效果。
如:胰岛素--------------促进葡萄糖、氨基酸的吸收。
生长激素---------------促进有丝分裂。
氢化可的松---------有利于细胞粘着、细胞增殖。
9、生长因子类:主要由组织或血清提供。
如:成纤维细胞生长因子(FGF),
表皮生长因子(EGF)。
(二)培养液的物理性质。
1、PH: 最好,~
酚红是常用的指示剂:
2、渗透压:人类血浆290mOsm / kg 。
一般介于260~320 mOsm / kg。
3、温度:
除了影响细胞生长外,也与PH值有关。
如:低温时,CO2 溶解多,而影响PH值。
4、粘度:血清的存在,直接影响培养液粘度。粘度对细胞生长影响较少,但在细胞培养或用胰蛋白酶处理时,为尽量减少细胞损伤,可通过提高培养液粘度来克服。加羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮来增加粘度,这对低或无血清尤为重要。
5、表面张力和泡沫
表面张力有利于培养物粘着与底物上面。
在悬浮培养中,减少泡沫的产生,加防泡沫硅。
二、平衡盐溶液
有三个功效:
1、作为稀释、洗涤的液体,是各种人工合成培养基的基础用液。
2、提供缓冲系统,使培养液的PH维持在培养细胞的生理范围内。
3、提供细胞代谢的水分和无机离子、能量。
三、天然培养基
包括体液、组织提取液。
如:血清、血浆、鸡胚浸出液、水解乳蛋白、胶原等。