文档介绍：第卷第期东北农业大学学报:
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东北梅花鹿一基因载体的构建
秦欣欣,孙红梅,褚文辉,王大涛,郭倩倩,章秀婷,李春义
.江苏科技大学生物与化学工程学院,江苏镇江:.中国农业科学院特产研究所,
吉林省特种经济动物分子生物学国家重点实验室培育基地,长春
摘要:构建东北梅花鹿一基因特异小分子干扰真核干扰载体,并获得稳定感染生茸
区骨膜细胞系。设计对一特异性,两端分别带有/酶切位点和一个发夹结
构,通过基因克隆技术将其插入真核表达质粒中,构建一表达栽体,利用和测序筛
选出阳性质粒。,在倒置显微镜下观察转染效果并收集、浓缩
病毒质粒,感染生茸区骨膜细胞。结果表明,成功构建东北梅花鹿一基因载体,获得稳定传代被感
染生茸区骨膜细胞系,为进一步研究一基因在鹿茸再生中的作用奠定基础。
关键词:鹿茸再生;一基因;;生茸骨膜细胞
中图分类号:.; 文献标志码: 文章编号:———
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收稿日期:——
基金项目:国家自然科学基金,前期研究专项
作者简介:秦欣欣一,女,博士,研究方向为鹿茸丌/丁生物学。: .

通讯作者:李春义,研究员,博士生导师,研究方向为鹿茸生长发育机制与鹿茸基因工程学研究,:
· · 东北农业大学学报第卷
一是动物半乳糖凝集素家族—.
成员之一,在神经修复、血管再生、软骨; —一一:—
形成及免疫反应等多个生理过程中发挥重要作
用。有研究认为一在肿瘤细胞中起重要调’; —一一:
控作用,与肿瘤发生有密切关系,研究发现—
一在鹿茸生茸区骨膜细胞旦旦旦; —一一:
, /角柄骨膜细胞
,中表达与普通面部骨膜细胞. ’
,中相比存在明显差异,鹿茸每年其中下划线处为酶切位点,两个酶切位点间
周期性再生能保持令人惊异的速度而不癌变,且序列为发夹结构。四条寡核苷酸单链由上海宝生
鹿茸周期性完全再生主要依赖鹿茸干细胞鹿茸干物公司合成。
细胞包括生茸区骨膜干细胞和角柄骨膜干细胞, .. 退火
推测一可能与鹿茸再生过程有紧密联按照引物合成单每正义链/反义链
系,起信号分子作用,而在鹿茸中作用溶于一定体积无菌双蒸水中配成最终浓度为
机制对癌症研究很有意义。干扰首先发现于·溶液,分别各取单链加入退火
秀丽隐杆线虫中,是年由等发现转录后缓冲液中,混合后在仪上进行退火反应。
基因沉默机制。本试验旨在建立东北梅花鹿.. 重组质粒构建及鉴定
一基因载体,并获得稳定感染生茸区将经和双酶切胶回收后
骨膜细胞,为一在鹿茸再生中的进一步研与稀释倍后退火产物按照:在连接酶
究奠定基础。作用下进行连接。将连接产物加入到超级感受态
中,进行涂布培养,并挑取阳性菌株提取质
材料及方法
粒,以及和双酶切鉴定,并测序
. 材料与试剂进一步验证。
病毒系统:慢病毒载体系统由北