文档介绍：摇摇圆园员圆韵糟贼员园员员远缘
安徽医科大学学报粤糟贼葬哉灶蚤增藻则泽蚤贼葬贼蚤泽酝藻凿蚤糟蚤灶葬造蚤泽粤灶澡怎蚤;源苑( ) · ·
云郧蕴圆基因砸晕粤蚤慢病毒载体的构建及外源性筛选与鉴定
王慧方,郑振中
摇摇圆云郧蕴圆云郧蕴圆砸晕粤蚤
摘要目的拟构建人纤维蛋白原样蛋白( )凝血酶列,构建和鉴定人基因慢病毒载体,为
砸晕粤云郧蕴圆云郧蕴圆
原酶基因干扰慢病毒载体,为调控人凝血酶原研究基因的功能提供有效工具。
摇云郧蕴圆
酶表达水平提供有利的工具。方法根据人凝血酶
皂砸晕粤源
原酶基因的序列选择条靶序列,设计合成靶序列的员摇材料与方法
韵造蚤早燥阅晕粤阅晕粤粤早藻耘糟燥砸
,退火形成双链,与经和双酶切援匀耘运圆怨猿栽
责郧悦杂陨蕴鄄郧云孕云郧蕴圆ⅠⅠ员员摇材料与试剂摇细胞(中国科学院上
后的载体连接产生慢病毒载体,采用
孕悦砸宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼海细胞所);制备编码慢病毒颗粒的重组病毒质粒
及测序鉴定,应用技术外源性筛选干扰效
责郧悦杂陨蕴鄄郧云孕及辅助包装原件载体质粒(上海吉凯基因化学公
率高的有效靶序列。用慢病毒包装系统、蕴蚤责燥枣藻糟贼葬皂蚤灶藻圆园园园栽砸陨扎燥造陨灶增蚤贼则燥早藻灶
责匀藻造责藻则员郾园责匀藻造责藻则圆郾园圆怨猿栽司); 、试剂盒( 公
和共转染包装细胞,包装产生砸晕粤孕则燥皂藻早葬砸晕葬泽藻鄄
摇孕悦砸司);逆转录试剂盒( 公司);
慢病毒,以系列稀释法测定病毒滴度。结果扩增和测枣则藻藻粤曾赠早藻灶云造葬早杂蚤早皂葬
云郧蕴圆( 公司);小鼠抗人抗体(美国
序结果显示,人凝血酶原酶核苷酸链序列插入正确, 陨早郧郧粤孕阅匀
外源性筛选确定一条干扰效率高的有效靶序列。利用筛选公司);山羊抗小鼠抗体、小鼠抗人抗
杂葬灶贼葬悦则怎扎
确定的有效靶序列,包装产生慢病毒,其浓缩病毒悬液的滴体(美国公司)。
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度为。结论证实实验成功构建了基员援圆摇设计泽澡砸晕粤慢病毒重组载体摇从
砸晕粤云郧蕴圆砸晕粤
因干扰慢病毒载体。中查找大鼠基因,按干扰序列设计原
摇砸晕粤云郧蕴圆源云郧蕴圆糟凿泽
关键词慢病毒载体; 干扰; 基因
摇匝苑愿圆则,设计组针对基因区的靶序列,同时
中图分类号孕杂悦鄄
粤员园园园原员源怨圆圆园员圆员园原员员远缘原园源按公认标准设计合成无意义序列作阴性对照(
文献标志码文章编号( ) 晕悦
)。每组序列均按发卡结构模式设计合成,在其
摇摇圆枣蚤遭则蚤灶燥早藻灶鄄造蚤噪藻责则燥贼藻蚤灶圆两端设计酶切位点黏端,直接联入酶切后的载体,见
纤维蛋白原样蛋白( , 员阅晕粤
云郧蕴圆员原圆表。片段均由上海吉凯基因公司合成。
)凝血酶原酶是一种新的促凝因子[ ]。与经援
云郧蕴圆员猿摇构建重组载体摇将设计合成的寡核苷酸片段
典的内、外源性凝血途径不同, 能直接催化凝阅晕粤
稀释后在退火反应体系中形成双链片段,通过
血酶原转化为凝血酶,降解纤维蛋白原为不溶性纤栽源阅晕粤粤早藻耘糟燥砸
连接酶插入到经和双酶切后
维蛋白,导致纤维蛋白沉积和血栓形成,启动凝血过责郧悦杂陨蕴鄄郧云孕ⅠⅠ员
猿云郧蕴圆的