文档介绍：核磁共振谱在药物定量分析中的应用研究项目完成单位:国家药物及代谢产物分析研究中心项目完成人:贺文义1、核磁共振1H谱检测康爱新生素胶囊甲基素的含量方法建立药物胶囊是常用药物剂型的一种,通常对其中主要成分的检测是用色谱法或化学滴定等方法,比较费时和费力,康爱新生素胶囊中主要成分为甲基素。根据该化合物的1H谱特征峰,用TMS为外标(1‰TMS/CDCL3),甲基素为内标,取胶囊5粒,将内空物充分混合,定量称取五份(10±mg)用1mlCDCL3溶解,温控25℃,D1=15秒,nt=8测试1H谱,经积分后按公式计算出胶囊中主要成分的含量。实验方法:取胶囊五粒,将内容取出充分混合,将定量称取五份(±10mg),每份用1mlCDCL3溶解,温控25℃,D1=15秒,nt=8测试1H谱。另称取甲激素±10mg在相同条件下测试1H谱,图谱以TMS为内标积分值定为10,。计算公式:C=Ma0/Sa0==:M=样品量(mg)Ma=Sa×CSa=特征峰面积积分甲激素在胶囊中的含量=MA/M×100%-NMR联用技术鉴定同分异构体羧基荧光素(caboxvfluorescein)是荧光素衍生物的一种,其产品中同时含有5-FAM(caboxyfluorescein-5-imidylester)和6-FAM(caboxyfluorescein-6-imidylester),5-FAM较6-FAM更经常使用。其广泛存在于荧光标记试盒,用于DNA自动测序。本品采用Varian公司的Prostar-230D2O,CH3OH(%冰醋酸),其洗脱比例70:30,流速为1ml/min,检测器为VarianProstar-330二极管振列检测器,紫外检测波长为242nm。,。LC-MS所得到分子量均为376。在INOVA-500LC-NMR上,用停止流动的方法采集LC-NMR1H谱。进样量为25ml(2mg/200ml),,累加次数为256。通过1H谱分析,-FAM,--NMR谱图。-=,=、高分辨魔角核磁共振技术定量跟踪Na-Fmoc保护的羟基氨基酸的糖基化反应1)概述九十年代初发展的高分辨魔角核磁共振技术(Highresolutionmagicspinning(HR/MAS)NMR)采用魔角旋转消除非均相溶液中磁化率不同而造成的谱线加宽。另外特殊设计的超微量探头(gHXNanoProbe)与常规的高分辨液相探头不同,体积很小的样品(40µL)可以100%地保持在检测线圈内,填充因子高,样品管和塞子磁化率匹配性好,致使磁化率的不连续性达到最小,从而得到最高灵敏度和最小线宽的NMR谱图。该技术不破坏样品,可灵敏、直接地提供偶联在树脂上化合物的结构信息。目前,广泛用于监测固相合成反应;鉴定固载在单一树脂珠上化合物的结构;以及分析树脂上固载化化合物的构象等等。该项目首先探讨了不同常规树脂、不同溶剂以及温度对高分辨魔角核磁共振技术中1HNMR线宽的影响,然后利用该技术指导优化Na-Fmoc保护的羟基氨基酸固相糖基化反应的条件,并利用该技术定量研究不同Na-Fmoc保护羟基氨基酸的固相糖基化反应。固相组合合成糖肽库是十分热门的研究领域。该项目将Na-Fmoc保护的羟基氨基酸偶联到TeataGelSNH2树脂上,。用HR/MASNMR分析技术不仅跟踪优化了固相羟基氨基酸的糖化反应条件,而且选择固载在树脂上的糖基化Na-Fmoc保护羟基氨基酸1H30NMR中最低场,且分辨好的Fmoc保护基信号做为内标,糖上乙酸基的积分面积为标准直接定量了键合在TeataGelSNH2树脂上氨基酸苷化的产率。利用四个羟基未保护的Na-Fmoc氨基酸和七种全乙酰化糖为原料,合成了28个糖基化Na-Fmoc氨基酸,均用高分辨魔角核磁共振技术定量。该研究为进一步合成“一株一化和物”的糖肽库打下了坚实的基础。2)结果与讨论A树脂、溶剂和温度对1HNMR线宽的影响有机合成中使用的固相载体有赖于两个相互关联的部分:①不溶解但可溶胀的高聚物材料,并且该材料对合成中使用的条件是惰性的;②将底物与以上固相载体相连,并利于中间体和终产物从固相载体上全部切下来的不同连接桥分子片段。研究表明固相载体的氢谱主要由线宽衡量。本文将Fmoc-L-Ser(OtBu)-OH偶联到具有相同的交联聚苯乙烯