文档介绍：微生物学检验菌落总数的测定1 原理微生物活体数量的测定方法,常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液,再取一定的稀释液接种,使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内,最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克(或mL)样品中的活菌数量。2  平皿:φ90mm。:容量250mL,500mL。 无菌吸管:1mL(),10mL()或微量移液器及吸头。 灭菌锅。。。 超净工作台。。 检验程序菌落总数的检验程序见下图。检样10g样品+90mL无菌生理水,均质 10倍系列稀释 选择至少3个适宜样品稀释均液 方法①↙      ↘方法②各取1mL分别加入无菌培养皿中,每皿中加入15mL~20mL平板计数琼脂培养基,混匀,凝固。 在培养皿中加入15mL~20mL平板计数琼脂培养基,凝固。,涂布均匀。 ↘      ↙在36℃±1℃倒置培养24~48小时 计算各平板菌落数 计算菌落总数  平板计数琼脂培养基:LB培养基(最常用)牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 5g琼脂  20g蒸馏水 1LpH   ~,煮沸溶解,调节pH值,分装锥形瓶中,121℃高压灭菌30分钟。:,121℃高压灭菌30分钟。: 固体样品:称取10g固体样品置于盛有90mL无菌生理盐水的无菌锥形瓶中(内装数粒无菌玻璃珠),在旋转式摇床上200r/min充分振荡30min,制成1:10的样品均液,即10-1稀释液。 用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品均液1mL(吸取前需要摇匀1:10稀释液),缓慢加入盛有9mL无菌生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不能触及稀释液面),用漩涡振荡器振荡,混合均匀,制成1:100的样品稀释均液。 ,制备10倍系列样品稀释液,每递增稀释一次,换用一次1mL无菌吸管或吸头。,选择3~4个适宜稀释度的样品均液(比如10-6,10-7,10-8,10-9稀释液)。:用1mL无菌吸管或微量移液器分别吸取不同稀释度的菌悬液1mL于一个无菌培养皿中(每个稀释度做三个重复),再在培养皿中分别倒入10~15mL已融化并冷却至45~50℃的培养基,盖好平皿盖子,趁热轻轻转动培养皿,使菌液与培养基充分混合均匀,冷凝后在恒温培养箱中倒置培养24~28h,培养温度为36℃±1℃。同时以无菌水作空白对照。注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:10-8,10-9,10-10。接种方法2:,将稀释液涂布均匀,吸附,在恒温培养箱中倒置培养24~28h,培养温度为36℃±1℃。同时以无菌水作空白对照。()注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:10-7,10-8,10-9。4.