文档介绍：微生物检测菌落总数测定方法微生物学检验菌落总数的测定1原理微生物活体数量的测定方法,常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液,再取一定的稀释液接种,使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内,最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克(或mL)样品中的活菌数量。:φ90mm。:容量250mL,500mL。:1mL(),10mL()或微量移液器及吸头。。。。。。。检样10g样品+90mL无菌生理水,均质10倍系列稀释选择至少3个适宜样品稀释均液方法???方法?各取1mL分别加入无菌培养皿中,在培养皿中加入15mL~20mL平板计数每皿中加入15mL~20mL平板计数琼脂培养基,凝固。然后在每皿中加入琼脂培养基,混匀,凝固。,涂布均匀。??在36??1?倒置培养24,:LB培养基(最常用),,煮沸溶解,调节pH值,分装锥形瓶中,121?高压灭菌30分钟。:,121?高压灭菌30分钟。::称取10g固体样品置于盛有90mL无菌生理盐水的无菌锥形瓶中(内装数粒无菌玻璃珠),在旋转式摇床上200r/min充分振荡30min,制成1:10的样品均-1液,即10稀释液。:10样品均液1mL(吸取前需要摇匀1:10稀释液),缓慢加入盛有9mL无菌生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不能触及稀释液面),用漩涡振荡器振荡,混合均匀,制成1:100的样品稀释均液。,制备10倍系列样品稀释液,每递增稀释一次,换用一次1mL无菌吸管或吸头。-6-,选择3~4个适宜稀释度的样品均液(比如10,10,-8-910,10稀释液)。:用1mL无菌吸管或微量移液器分别吸取不同稀释度的菌悬液1mL于一个无菌培养皿中(每个稀释度做三个重复),再在培养皿中分别倒入10,15mL已融化并冷却至45~50?的培养基,盖好平皿盖子,趁热轻轻转动培养皿,使菌液与培养基充分混合均匀,冷凝后在恒温培养箱中倒置培养24,,,,,培养温度为36??1?。同时以无菌水作空白对照。-8-9-10注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:10,10,10。接种方法2:,,稀释液均液于计数培养基平板上,将稀释液涂布均匀,吸附,在恒温培养箱中倒置培养24,,,,,培养温度为36??1?。同时以无菌水作空白对照。()-7-8-9注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:10,10,10。,.3菌落计数可用肉眼观察,必要时借用放大镜或菌落计数器,