C1ql1基因酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活检测.doc

文档介绍：
C1ql1 基因酵母双杂交诱饵载体的构建及自
激活检测#
陈冉1,2,廉滋珍2,薛樱子1,2,陈雷3,蔡冬青1,2,秦俊文1,2,齐绪峰1,2,武征1,2,
5
10
15
20
25
30
35
40
肖銮娟2,禹艳红1,2**
(1. 暨南大学再生医学教育部重点实验室,广州 510632;
2. 暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系,广州 510632;
3. 暨南大学附属第一医院麻醉科,广州 510632)
摘要:目的:通过钓取 C1ql1 的相互作用蛋白研究未知功能的小分泌蛋白 C1ql1 的功能,本
研究构建 pGBKT7-C1ql1 酵母双杂交诱饵载体并验证其自激活活性。方法:采用 PCR 技术
扩增出小鼠 C1ql1(mC1ql1)基因去除信号肽后的区段,连接到酵母双杂交诱饵载体 pGBKT7
中。采用醋酸锂转化法将阳性 pGBKT7-mC1ql1 质粒转化酵母 Y2HGold 菌株。利用不同营
养缺陷型培养基进行自激活检测和毒性检测。结果:用 PCR 法、EcoR I /BamH I 双酶切法
和测序法鉴定重组 pGBKT7-mC1ql1 载体,结果表明构建的 mC1ql1 基因的诱饵载体构建成
功,读码框正确。转化 Y2HGold 酵母菌后,在 SD/-Trp/X-α-gal 固体培养基上未长出蓝色
菌落,而在 SD/-Trp/X-α-gal/AbA 固体培养基上未见有菌落生长。结论:诱饵载体对酵母
菌株 Y2HGold 没有转录自激活活性和毒害作用。说明构建的诱饵载体可以用于酵母双杂交
系统中,为下一步筛选 mC1ql1 互作蛋白奠定了基础。
关键词:C1ql1 基因;诱饵载体;酵母双杂交;自激活;毒性检测
中图分类号:Q782
Construction of mC1ql1 Yeast Two-Hybrid Bait Vector and
Detection of Its Self-activated Activity
Chen Ran1,2, Lian Zizhen2, Xue Yingzi1,2, Chen Lei3, Cai Dongqing1,2, Qin Junwen1,2,
Qi Xufeng1,2, Wu Zheng1,2, Xiao Luanjuan2, Yu Yanhong1,2
(1. Key Laboratory for Regenerative Medicine, Ministry of Education, Jinan University,
GuangZhou 510632;
2. Department of Developmental and Regenerative Biology, College of Life Science and
Technology, Jinan University, GuangZhou 510632;
3. Department of Anesthesiology, First Affiliated Hospital, Jinan University, GuangZhou 510632)
Abstract: Objective: To reveal the function of