文档介绍：英汉缩略语名词对照鲥英文缩写英文名称中文名称碱基对互补脱氧核塘核酸双蒸水焦炭酸二乙脂二甲基亚砜脱氧核糖核酸三磷酸脱氧核苷乙二胺四乙酸半乳糖葡萄糖千道尔顿亮氨酸蛋氨酸光密度聚合酶链式反应核糖核酸核糖核酸酶转数/分技低轮状病毒十二烷基硫酸钠三氯乙酸四甲基乙二胺尿嘧啶琋,疦’聚乙二醇∞重庆医科大学硬士研究生学位论文Ⅳ瞳
酵母双杂交秆∠低持新肿床《外壳蛋白斩靥宓墓菇摘要酵母双杂交技术自创立以来已成为研究蛋白之间相互作用的重要方法。传统的酵母双杂交所研究的蛋白间相互作用是在细胞核内完成的,而近年来发展起来的酵母双杂交衍生系统一募集系统能够将蛋白间相互作用的研究定位在细胞膜上,更具备了灵敏度高、假阳性少等突出优点。在本研究中,我们利用了一对已知蛋白之间的相互作用来验证秆∠低常云诮ù松秆∠低掣惴旱卦擞糜谄他蛋白间相互作用的研究以及相互作用蛋白的钓取。病。与其宿主细胞表面受体的结合是病毒感染的第一必备步骤,因此,明确受体性质,对该病的预防和治疗有十分重要的意义。现有研究提示,外壳蛋白遣《疚绞芴宓闹饕E涮宓鞍住T诒狙究中,我们采用法扩增外壳蛋白嗦牖虿⒔淇隆到载体上,构建成适合于秆∠低车挠斩粒并排除了诱饵的自激活作用,表明我们可以将该诱饵质粒用于筛选系统,为进一步从敏感细胞文库中钓取受体奠定了基轮状病毒肠炎及其肠道外并发症是威胁儿童健康的重要疾础。重庆医科大学硕士研究生学位论文国家自然科学基金资助项目
关键词:酵母双杂交系统,技低常肿床《荆琕蛋自重庆医科大学硕士研究生学位论文
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第一部分酵母双杂交秆∠低扯砸阎5鞍紫嗷プ饔玫难橹前言牧嫌敕椒实验材料酵母双杂交技术由等晔紫扔τ谩>涞慕湍杆咏幌低乘研究的蛋白质问相互作用都是在细胞核内完成的,这对于许多细胞膜蛋白来说是不适用的。近年来,由等【拷⒌腟募集系统约坝葿等涓谋欧⒄刮5腞募集系统芄唤ǖ鞍字饰氏嗷プ饔玫难芯慷位在细胞膜上,从而克服了传统酵母双杂交技术的一些局限性。在本研究中,我们利用了一对已知蛋白:罨鞍准っ和同系物】在酵母细胞内发生的相互作用来验证秆∠低常云诮ù筛选系统用于其他未知蛋白相互作用的研究以及相互作用蛋白的钓取。秆∠低秤蒁瓵惠赠,包括:质粒:酵母温度缺陷株。:糏:图:痙—
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葡萄糖·将葡萄糖配成浓度为%的溶液,单独过滤除菌后取加入已灭菌的其他成分中。下同。嘌葡萄糖氨基酸成分‘各·色氨酸、赖氨酸、组氨酸、尿嘧啶和腺嘌呤各配成浓度为痬娜芤海单独过滤除菌后各取尤胍衙鹁钠渌煞种小培养基半乳糖蜜三糖甘油酵母氮源硫酸铵·色氨酸,赖氨酸、组氨酸和腺嘌呤各配成浓度为/的溶液,.
实验方法ò彼帷⒗蛋彼帷⒆榘彼岷拖汆堰矢髋涑膳ǘ任/的溶液,单独过滤除菌后各取尤胍衙鹁钠渌煞种小5鞍彼崤涑膳ǘ任痬娜芤海单独过滤除菌后取尤胍衙鹁钠渌煞种小以上液体培养基加入琼脂粉至终浓度为%,、鲑精卯和均购自荆叭依次配制成浓度为/.、甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、⒏拾彼帷×蛋白质上样缓冲液均购自鼎国公司。、碱、、氢氧化钠、⒈!、甲醇均为化学分析纯试剂。.膜购自尽B酥轿猈公司产品。.>℃和℃,均含水托盘以保证培养箱湿度。.、半干电转器本┦┍狈缴锓⒄褂邢薰荆琒:转速范围,,孔径⒊N绿ㄊ嚼胄幕德国荆⒌臀吕涠忱胄幕日本荆珻、,不待其完全溶解,无菌接种环蘸取少许冰渣,划线接种于桨澹娴怪门嘌恋タ寺〈笮≡。板。重庆医科大学硕士研究生学位论文