汗腺细胞来源的诱导多能性干细胞构建及其鉴定.doc

文档介绍：
汗腺细胞来源的诱导多能性干细胞构建及
其鉴定#
秦明德,梁含思*
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(苏州大学江苏省干细胞与生物医用材料重点实验室,江苏苏州 215000)
摘要:本文中获得汗腺细胞来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)。方
法从手术废弃幼儿手指中提取出汗腺,体外培养,待汗腺细胞生长约 10 天后,以 1×105
的密度接种于 6cm 细胞培养皿中,向汗腺细胞培养基中加入 4 种胚胎干细胞的转录因子基
因:Oct4、Sox2、Klf4 和 c-Myc 的慢病毒。2-3 天后,消化接种到铺有滋养层细胞的 6cm 细
胞培养皿中,培养约 10 天后,挑选克隆和细胞形态与胚胎干细胞相同的克隆,接种于铺有
滋养层细胞的 24 孔板中。培养约 10 天后,再次挑选克隆和细胞形态与胚胎干细胞相同的克
隆,接种于铺有滋养层细胞的 6 孔板中。RT-PCR 和免疫荧光技术检测汗腺细胞标志基因:
CEA、CK14 和 CK18;RT-PCR 检测诱导后细胞的人胚胎干细胞标志基因:Oct4、Sox2、
KLf4、c-Myc 和 nanong,免疫荧光技术检测是人胚胎干细胞表面标志基因:ssea3、ssea4、
TRA-1-60 和 TRA-1-81 以及核标志基因:Oct4。结果 1、RT-PCR 和免疫荧光技术检测从六
指中提取的细胞表达汗腺细胞的标志基因。2、RT-PCR 和免疫荧光技术检测诱导后细胞表
达人胚胎干细胞标志基因。结论汗腺细胞经过四因子的诱导后,可重编程为诱导多能干细
胞。
关键词:汗腺细胞;诱导多能干细胞; 重编程
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中图分类号:Q254
文献标志码:A
Construction and identification of Sweat gland cells derived
induced poluripotent stem cells
QIN Mingde, LIANG Hansi
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(Soochow University,Jiangsu Province Key Laboratory of stem cells and biomaterials,
JiangSu SuZhou 215000)
Abstract: In this paper,induction of pluripotent stem cells from sweat gland cells ( induced
pluripotent stem cell, iPS ). Methods six children sweat gland, extracted from the cultured in vitro,
the sweat gland cells grown for about 10 days, with 1 * 105 were inoculated in 6cm cells in a Petri
dish, to sweat gland cell culture into 4 human embryonic stem cell transcription factor gene: slow
virus