文档介绍：微生物检测菌落总数测定方法
方案一
微生物学检验菌落总数的测定
1 原理
微生物活体数量的测定方法,常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液,再取一定的稀释液接种,使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内,最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克(或mL)样品中的活菌数量。
2 材料和仪器
恒温培养箱:36℃±1℃。
冰箱:2~5℃。
灭菌锅。
超净工作台。
均质器。
漩涡振荡器。
微波炉。
天平:。
平皿:φ90mm。
锥形瓶250ml,500ml。
(量程分别为:0~1000μl,0~100μl,0~10μl)及吸头。
涂棒。
精密pH试纸。
酒精灯。
指形瓶。
剪刀,镊子。
牛皮纸。
医用酒精及脱脂棉。
橡胶手套。
记号笔。
3 检验程序
菌落总数的检验程序见下图。
↓
方法①↙↘方法②
↘↙
↓
↓
4 操作步骤
培养基和试剂的配制
平板计数琼脂培养基(pl)培养基(最常用)
蒸馏水 1L
pH ~
将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH值,分装锥形瓶中,121℃高压灭菌15
分钟。
无菌生理盐水的配制:
,121℃高压灭菌15分钟。
样品的稀释:
称取25g样品置盛有225mL生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/
min均质1min~2min。制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7,10-8,10-9
稀释液。
根据对样品活菌数量的估计,选择3~4个适宜稀释度的样品均液(比如10-6,10-7,
10-8,10-9稀释液)。
平板接种与培养
接种方法1:
用1mL微量移液器吸取不同稀释度的菌悬液1mL于一个无菌培养皿中(每个稀释度做
三个重复),再在培养皿中分别倒入10~15mL已融化并冷却至45~50℃的培养基,盖好平
皿盖子,趁热轻轻转动培养皿,使菌液与培养基充分混合均匀,冷凝后在恒温培养箱中倒置
培养24~28h,培养温度为36℃±1℃。同时以稀释液无菌生理盐水作空白对照。
-8-9-10注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:10,10,10。
接种方法2:
,将稀释液
涂布均匀,吸附,在恒温培养箱中倒置培养24~28h,培养温度为36℃±1℃。同时以无菌
生理盐水作空白对照。()
注:比如1000亿CFU样品稀释梯度可选择为:10-7,10-8,10-9。
菌落计数
可用