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桃叶珊瑚苷提取及对细胞氧化损伤保护作用①谱验室光实韩震李光坤董欢欢薛宏宇②“引言实验部分第卷,第月桃叶珊瑚苷是一种广泛存在于自然界许多植物种属中的环烯醚萜类化合物,具有通便、护肝、抗微生物、止痛、抗肿瘤、抗炎、抗凋亡等多种生物学活性F浞肿恿课.,味苦,易溶于水、乙醇、甲醇,不溶于氯仿、乙醚、石油醚等溶剂中。自发现天然植物种属中存在有桃叶珊瑚苷以来,相继在车前草科、玄参科、球花科、杜仲科等植物种属中发现了此化合物,其中以车前草和杜仲中的含量很高。桃叶珊瑚苷的主要来源为天然植物中提取,也有人利用组培的方法从杜仲的愈伤组织提取桃叶珊瑚苷。近年来,由于桃叶珊瑚苷具有分子量小、水溶性高,易于透过血一脑屏障等优点,被广泛的应用于脑神经元细胞损伤保护的研究凸罅康难芯拷峁砻鳎浔;ぱ趸鹕说淖饔没瓶赡苁峭ü;は赴馐氧化损伤来实现的。因此,本研究采用色谱联合大孔吸附树脂和柱层析等方法从车前草中分离提出桃叶珊瑚苷,并进一步进行其对细胞活性保护作用研究,为其应用临床研究奠定前期理论基础。材料与仪器一统克美国密理博公司籅偷缱犹炱德国型酶标仪拦鶷;狶型冷冻干燥系统ぢ驢公司恍U舴⑵上海亚荣生化仪器厂籉型高速万能粉碎机旖蚴刑┧固匾瞧有限公司司籑摘要利用色谱的方法对车前草中桃叶珊瑚苷进行了提取,并进一步测定其对氧化损伤的细胞的保护作用。经过一系列的提取和分离,薄层色谱检测,最终获得白色无定形的桃叶珊瑚苷@过氧化氢。建立直接的氧化损伤细胞凋亡模型,利用ḿ煅槠兰厶乙渡汉鬈斩韵赴谋护效应。结果表明,桃叶珊瑚苷增强了细胞活力并且能够很好的抑制对细胞的毒性。关键词桃叶珊瑚苷;薄层色谱法;氧化损伤中图分类号:.文献标识码:文章编号:琋口拗菅г夯в肷蒲аг喊不帐∷拗菔秀旰又新宿州学院自旋电子与纳米材料安徽省重点实验室培育基地安徽省宿州市汴河中路号①安徽省自然科学基金项目资助凰尥鈒学院自旋电子与纳米材料安徽省重点实验室培育基地开放课题资助坏胤礁咝9壹洞笱葱麓匆笛盗芳苹钅凰拗菅г捍笱蒲衅教ㄏ钅②联系人,手机:;猰篽作者简介:薛宏字,女,吉林省长春市入,。收稿日期:唤邮苋掌冢甤
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结果与讨论大孔树脂旖蚺┮┕煞萦邢薰臼髦;柱层析用硅胶嗟汉Q蠡こ;车前草药材拗菔兄幸┎呐⒐;桃叶珊瑚苷对照品慷取ィ拦鶶公司蚆一拦鶶公司黄渌约辆9治实验方法车前草,粉碎机粉碎,用倍体积分数为%的乙醇浸泡过夜,超声提取危看,将提取液合并,低温真空回收,置于水浴锅上浓缩,离心后取上清液,注入预处理过的大孔脱液,薄层色谱检测,收集合并含目标点的馏分。馏分减压浓缩,将浓缩物进行硅胶柱层析,收集合并含目标点的馏分,减压浓缩,如此重复硅胶柱层析,得到层析液,收集、冷冻干燥,最后得到白色无定形粉末。将上述方法得到的粉末进行薄层层析色谱法检测,准确称取桃叶珊瑚苷标准品%的乙醇溶液,将其配成浓度梯度分别为、.痬#直鸨昙俏狝、。同样量取%的乙醇溶液将样品提取物溶解,配制成浓度为/的样品溶液,标记为@妹肝芤次将标准品和样品溶液点在硅胶板上,每个浓度溶液点样次,并做好记号。利用展开剂箍<成分按体积比配制,氯仿:甲醇:石油醚:乙酸乙酯::展开,展开结束后将硅胶板烘干,然后将显色剂萘酚一硫酸溶液喷上硅胶板,再将其烘干显色,拍照。取对数生长期的细胞,按个细胞接种于孔培养板,在。%姆跸渲培养笥糜谑笛椤L