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人重组质粒的构建和真核细胞转染癴而门墩腜,≯Ⅳ’·论著·厄蠷咖鷗波擞狼,周平坤,让蔚清,鑓∞甀易澹且恢炙堪彼幔瞻彼岬鞍准っ福琒在脂肪组织和神经组织中丰富表达。。据已知文献报道,在调节糖脂代谢叫。、缺血性神经元损伤体的定位,主要影响细胞的/;弧期中心体分裂和有丝分裂进程等。鉴于在细胞周期调控中的作用,以及前期的研究发现细胞中蛋白水电离辐射损伤反应之间的关系,尤其在放射损伤细胞的周期调节或能量代谢中的潜在功能机制有重要意本文利用刈榧际踅玈虮嗦胄蛄与—刈楣菇ㄐ碌恼婧吮泶镌靥錺达,为进一步研究在因对电离辐射诱导的人文库、细胞均由军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验室保存谭伟豫跸,黄盐诱导激酶—琒是虻囊恢盅切停粲贏活化蛋白激酶—体液调节∞⒑谏睾铣傻鹘谝弧5确矫娑加兄匾W饔谩近年来,取ǖ溃琒ㄎ挥诩淦谙赴行体,具有中心体激酶活性,通过磷酸化中心体连接子蛋白狽腟位点而调节其在间期细胞中心弼作者简介:谭伟,女,湖南湘潭人,硕士研究生。平受电离辐射诱导表达,提示可能在细胞放射损伤反应中发挥作用。为此,研究表达与细胞义。—猄渌沧V琳婧讼赴晒Ρ损伤奠定了实验基础。牧嫌敕椒主要材料和试剂提供,标签的—柿9鹤訮—公司,超保真酆厦浮谇忻负蚑用腹鹤訠公司,鹤远⑸锛际豕荆珼摘要:目的构建人基因真核表达载体。方法利用┰瞿康幕騍琍产物经纯化后与—线性质粒进行连接,连接产物转化大肠杆菌,涂卡那抗性琼脂糖平板;菌落⒚盖屑安庑蚣ㄑ性克隆后,抽提质粒,利用试剂瞬转细胞,螅瑆方法检测其在真核细胞内的表成功构建猄刈橹柿#⒃谡婧讼赴诔晒Ρ泶铩结论外源表达载体的构建成功,为进一步研究其功能奠定了实验基础。关键词:恢刈橹柿#坏鞍妆泶—锄二—,—瓹∞晒璐实用预防医学年第卷第赑文章编号:叭—达。结果中图分类号:文献标识码:眦鳎住R如行,&￡“加裪九埃瑉飂￡琇砌,丐癉啊阇瓾西啤投,,靶逆餐冢■薄—籖,基金项目:国家钅还易匀豢蒲Щ鹣钊作者单位:匣4笱Чü参郎г夯肪骋窖в敕派湮郎芯克湖南衡阳乱窖Э蒲г悍派溆敕湟窖а芯克通讯作者:让蔚清,猰簄..。×,叭琕‘;,琔笨趇,朝””,:騠瑀.Ⅲ..—.籔,#一——
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一Ⅷ嘌液:肚一Ⅷ嘌加入肚柿#籅液:肛腛门狹培养基锄甅脂质体,室温放置盒购自荆琌狹嘌疶歹兀感受态大肠杆菌、高纯度质粒小提中量试剂盒、蛋白质定量试剂盒购自荆珼凝胶回收试剂盒购自东盛公司;其余试剂:培养液、培养液、小牛血清、胰酶、蛋白裂解试剂和—.的甆蛄校蛄资料在.://甮畇痗—/谙叻治觯檎蚁喙孛盖形坏阈畔ⅰ8輕—一柿5亩嗫寺∥坏慵癝拿盖形点分布,本实验选用用实验室保存的腸鯬的模板,奶逑岛湍0迦缦拢×鲅罚嫜由目的片段与载体的酶切与连接旱泳鉴定条带位置正确后,直接过柱纯化,与—靥宸直鹁璈感受态大肠杆菌冰浴融化,加入连接产物,轻嫒燃肚蘅股嘏嘌鵏嬉〈卜胖随机选取菌落定阳性的菌落扩大培养并进行酶切鉴定,鉴定体系如下:重组质粒扯轻弹混匀后在℃条件下孵育大于鲋钟嘌螅羧沾赴ぶ撩芏却%左右后转染,转染前嘌怀唤獳液与呵崆峄煸龋椅路胖全培养基,螅占赴樘岬鞍祝琖检测蛋白的表达。清后加蛋白裂解液~”椅路跤胄模锨遄R浦列碌腅苤校挥鞍字识渴约梁邪此得鹘械鞍锥俊压半干转膜龃汉烊旧ê蟛榭醋Dば果,将膜按旨舫上应条带;封闭液%脱脂奶粉椅乱〈采戏跤梅獗找航ǹ固灏:壤∈停嘤μ┰瞿康钠蜸阳性的单克隆,需要进一步做质粒双酶切鉴定排