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产低温乳糖酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质的研究微生物生理生化多样性提供了可制1疚难芯.—————』竺兰竺兰沈莲莲杨瑞金华霄祁丹丹张文斌赵伟牧嫌敕椒工业微生物垫玫疃榈生生丛唑旦摘要:从新疆天山冻土中分离获得到一株产低温乳糖酶的耐冷茵。根据形态学方法,生理生化试验、基因序列同源性比对及系统发育树构建对该茵株进行鉴定,.。该茵株最适生长温度和最适产酶温度均为℃。在最适摇瓶条件下发酵液酶活为痬8妹肝0诿福诘臀孪戮哂薪细呋钚裕适作用温度为℃,℃时的酶活为最高酶活的%,媸钡拿富钗W罡呙富畹ァ8妹付热敏感,在℃。一些金属离子对该乳糖酶有一定的抑制作用,其中,悦富钚杂跋旌苄。“、”、“对该酶的抑制作用明显。关键词:低温乳糖酶;拉恩氏茵;产酶条件;..来源于植物、动物和微生物,能够催化乳糖中乳糖苷键水解为葡萄糖和半乳糖⋯。乳糖是牛乳中最主要的碳水化合物,含量为%~%某些人群不能吸收利用乳糖,会引发乳糖不耐症。目前,解决乳糖不耐症的最佳方法是用乳糖酶水解乳糖来生产低乳糖或者无乳糖乳制品。现在商业化的乳糖酶大多是常温型的,酶的最适反应温度是℃或者更高¨诘臀孪麓呋钚院艿汀S捎谌槠加工大部分操作都是在低温℃左右蠬此在乳品加工采用常温型或耐热型乳糖酶水解乳糖并不合适,而低温乳糖酶在低温有较高活性,能在低温下有效水解牛乳中的乳糖,因此具有很好的应用前景。目前国内外报道分离筛选的产低温乳糖酶菌株主要来自于极地和深海,多数为细菌∞剖,少数为酵母‘。天山冻土属我国高海拔高山常年冻土类型,在这种冻土环境中微生物产生了一系列适应低温、寡营养、强辐射、冻融等极端因子的分子机制,为冻土了海拔μ焐蕉惩林胁臀氯樘敲妇甑筛选、鉴定,并对其生长、产酶条件以及所产粗酶液酶学性质等方面进行了研究。新疆天山冻土0,/%,氯化钠,为±。初筛培养基:乳糖,蛋白胨湍,.,琼脂,自然,℃每培养基中加入经过滤除菌的芤斗发酵培养基:,初筛:吸取富集后的培养液用倍比稀释法制不痡..—....江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡;洗笱称费г海瘴尬实验材料实验方法膏琈·,...臀氯樘敲覆鸬纳秆第卷第,珻/基金项目:国家科技支撑计划项目“功能甜味剂与油脂制备关键技术研究及产业化”嗪;江苏省基金“疏水纳米微环境中半乳糖苷酶转糖基反应机制的研究”嗪臖。作者简介:沈莲莲,女,硕士,甿簊甧。.
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此。┰龇从μ跫#:产低温乳糖酶茵株的筛选、鉴定及酶学性质的研究同的稀释度移入初筛平板中,涂匀,℃培养,筛选蓝色菌落,分离纯化,斜面保存。复筛:选取上限温度为℃,即在该温度不生长的菌株为低温菌,选取此菌为试验菌株。活化斜面保藏试验菌株,转接发酵培养基于℃进行摇瓶培养L崛〈置敢海舛下水解活力,选取活性较高菌株。酶活定义:一定条件下,、生理生化试验参照《常见细菌鉴定手册》¨啊恫芟妇定手册》¨,对所得菌株进行革兰氏染色,透射电镜观察及生化指标鉴定。┰片段参照文献方法提取单菌落τ孟妇基因通用引物嫌我:’,下游弓:,】:.进行┰觯用标准的┰鎏逑到