文档介绍：液相色谱高效液相色谱法液相色谱是色谱中的一类分离与分析技术,其特点是以液体作为流动相。对于大量有机化合物、离子型化合物以及易受热分解或失去活性的物质,不能直接或不适合用气相色谱方法进行分析,因此高效液相色谱的应用领域不断扩大和深入。特别是近几十年来,液相色谱固定相的高度发展,仪器不断更新,高效液相色谱目前已成为许多学科科学研究和日常分析的重要手段。一、高效液相色谱法的特点1、高效液相色谱可以分离分析高极性,高分子量和离子型的各种物质,只要被分析对象能够溶解于可作为流动相的溶剂中并能够被检测,就可以直接进行分析。某些目前尚不能被直接检测,或检测灵敏度不够的,也可以采用各种衍生技术,实现这些物质的检测。2、高效液相色谱仪主要由高压输液泵、进样阀、柱子和检测器等组成。3、柱子的柱效(以理论板数计)很高,每米可达3万块以上。一般只使用20~25cm长的柱子。由于填料的不断发展和改进,目前最短的柱子只有3cm长,板数可达3000~4000。已能够满足一般分析的需要,并具有很高的分析速度。4、高效液相色谱仪通常在室温下操作,样品一般不须预处理,操作简便,很容易掌握。?5、高效液相色谱操作的难点在于流动相的选择。可以采用纯溶剂,二元或多元混合溶剂作流动相。但流动相的选择必须遵循一定的规律,并以科学的方法优选。?6、高效液相色谱技术也存在一些问题。柱子价格昂贵,要消耗大量的溶剂,而且许多溶剂对人体是有害的。高效液相色谱仪的价格和损耗也比气相色谱仪高。此外,尚缺少象气相色谱中氢火焰离子化检测器那样的通用型、高灵敏度的检测手段。因此,高效液相色谱无论在技术上,在理论上,还是在应用上都处于发展阶段。二、高效液相色谱系统下图是高效液相色谱系统的示意图。它由输液泵为核心的输液系统、进样器、柱子和检测器四个基本部分组成。实际仪器比图要复杂得多,它们可能有几个泵,几种检测器,自动进样系统,柱和检测器的温度控制系统等。1、输液系统输液系统的作用是向柱子提供压力高,流速稳定的流动相。它以高压输液泵为核心,由溶剂储槽、过滤器、输液泵、梯度溶剂混合器等组成。为了测量系统流量和压力,在输液系统的输出通路上还安装了不同类型的传感元件。①储液槽储液槽是盛装溶剂的容器。它可以是一个普通的溶剂瓶,或是一个专门设计的储液槽,用于除去溶剂中的气体。②过滤器各种泵的柱塞、进样阀的阀芯加工的精密度都非常高,微小的机械杂质将导致这些部件的损坏,而不能很好的工作。同时杂质在柱头的积累还影响柱子的使用,增大柱压,因此过滤溶剂,设置过滤器是必须的。过滤器的芯子通常是一个由多孔聚四***乙烯制成的具有一定空隙度的圆柱体,镶嵌在一个不锈钢的壳体中,形成一个完整的、安装方便的部件。③高压输液泵高压输液泵是现代液相色谱装置中最关键的设备,输出高压溶剂是实现快速分析的前提。除了最高使用压力外,还有线性流量范围,输出流量的精确度,泵的操作方式,流量输出或压力恒定的稳定性,以及易于操作和维修等。高效液相色谱仪中所用的泵可分为两类:恒压泵和恒流泵。恒压泵主要指气动放大泵,泵出口压力在系统中是恒定的,流速由柱的阻力决定。恒流泵有往复泵和注射泵,这类泵输出的溶剂流量恒定,柱前的压力由柱后的阻力确定。目前使用最多的是往复泵。?④梯度洗脱装置?当样品是一个含有不同种类组分的复杂混合物时,通常用一种纯的或固定组成的混合溶剂难以实现满意的分离,往往是先溜出来的峰分不开,而后溜出来的峰保留时间太长。因此,在液相色谱中常在一个样品的分析过程中,不断调整混合溶剂的组成,改变溶剂强度或溶剂的选择性。如果溶剂组成随洗馏时间按一定规律变化,称这种洗馏过程为梯度洗脱。梯度洗脱过程溶剂组成的变化可以是线性的,也可以是非线性的;可以是二元的,也可以是三元,甚至多元溶剂的混合。梯度洗脱装置根据溶剂混合时的压力分为两种类型:低压梯度和高压梯度。低压梯度是溶剂在常压下混合,然后用一个高压输液泵把它输送至柱系统中。多元溶剂在混合室或溶剂罐中混合,并以一定速度改变溶剂的组成。这种方式简单、经济,只能用往复泵。高压梯度使用两台高压输液泵,每台输送一种溶剂,两台泵输出的溶剂在一个混合室内混合。每台泵的溶剂流量由独立的电路或计算机控制,它们按一定比例改变。对于梯度系统系统来说,关键是要保证流速的稳定,梯度洗脱洗脱重现性好。因此混合室的体积应尽可能地小,且不存在死角。进样装置在液相色谱中,进样方式有微量注射器进样,进样阀进样,自动进样装置等。高效液相色谱最主要的特点要求进样器设计要耐高压,死体积小,与溶剂接触的部分具有很好的耐蚀性。进样口处的隔垫把系统和外界分开。为了使隔垫能承受上百公斤的压力,顶盖的通孔很细,而且长。在系统处于高压时,用一根金属棒压住隔垫的通孔部分,避免内部压力太大把隔垫冲破。液相色谱的进样口目前大部分都是采用六通阀,六通阀进样的原理如图