文档介绍：实验十-血糖的测定实验十血糖的测定血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定,~。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一,有着双重实际意义:其一,维持稳定的能源供给,满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二,保证机体不因进食致血糖浓度过高,导致糖的丢失。因此,血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同,大致分三类:氧化还原法,缩合法(主要有邻甲苯***法),酶法(主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法)。下边介绍两种方法供选择。一、葡萄糖氧化酶法【目的】,能进行血糖测定的操作。。【原理】葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase,GOD)能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶(peroxidase,POD)作用下,分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物,即Trinder反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比,在505nm波长处测定吸光度,与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下:【器材】试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计【试剂】 1.() ,用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸),然后用蒸馏水稀释至1L。 ,葡萄糖氧化酶1200U,4-氨基安替比林10mg,叠氮钠100mg,溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中,用1mol/L,加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存,4℃可稳定3个月。 (酚在空气中易氧化成红色,可先配成500g/L的溶液,贮存于棕色瓶中,用时稀释),用棕色瓶贮存。 ,4℃能够存放一个月。 ,加温助溶,冷却后加蒸馏水至1L。(100mmol/L),溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中,并移入100ml容量瓶内,再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml。(5mmol/L)于100ml容量瓶中,加12mmol/L苯甲酸溶液至刻度。【操作】取3支试管,编号,按下表操作。表3-12血糖测定操作步骤加入物(ml)空白管标准管测定管血清------,置37℃水浴中保温15分钟,在波长505nm处比色,以空白管调零,读取标准管及测定管吸光度。【计算】测定管吸光度血糖(mmol/L)=×5 标准管吸光度【注意事项】,应将标本用生理盐水稀释后再测定,结果乘以稀释倍数。,应弃之重配。因标本和标准用量少,其加量是否准确对测定结果影响较大,故其加量必须准确。-POD法的第一步反应特异性高,而由POD催化的第二步指示反应是非特异性的,易受标本中尿酸、维生素C、谷胱甘肽、胆红素等还原物的干扰,这些物质与色素原竞争H202,使测定结果偏低。。后经许多学者改进,采用2,4-二***酚、2-羟-3,5-二***苯磺酸等代替苯酚,由于这些化合物氧化生成的色素的摩尔吸光系数均高于苯酚,使反应灵敏度得以提高。【正常参考范围】~【临床意义】,或精神紧张、交感神经兴奋,肾上腺分泌增加时。 ⑴糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。⑵对抗胰岛素的激素分泌过多:如甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能及髓质功能亢进、腺垂体功能亢进、胰岛α-细胞瘤等。⑶颅内压增高:颅内压增高(如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等)刺激血糖中枢,出现高血糖。⑷脱水引起的高血糖:如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 、注射胰岛素或口服降血糖药过量。 ⑴胰岛素分泌过多:由胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等引起。⑵对抗胰岛素的激素分泌不足:如腺垂体功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退等。⑶严重肝病患者:肝贮存糖原及糖异生功能低下,不能有效调节血糖。【结果及分析】【思考题】,机体是如何调节血糖浓度恒定的? ,用蒸馏水是否能够,为什么? 二、邻甲苯***法【目的】了解测定血糖的原理和方法,要求在实验中培养学生严谨的作风和准确地进行实际操作的能力。【原理】葡萄糖在热的醋酸溶液中与邻甲苯***缩合生成葡萄糖邻甲苯***,后者脱水生成雪夫(Schiff)碱,再经结构重排,生成有色化合物。颜色的深浅与葡萄糖含量成正比。其反应式如下:葡萄糖