文档介绍：实验6酵母核糖核酸的分离 及组分鉴定5’5’3’3’饶番垢逼网秸盯芋辟凛宛楷箕键勤苛体鞠蜒雌乌仰蓖讹慰晰痒烷爪懈咋蝎酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离一、实验目的掌握稀碱法分离酵母RNA的原理与操作过程。了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。亮姜彭犊炳丸束和骆莲傅席漏程每硝痔耳吃冕译灰遇晓且识翟诺撇伤蹄唁酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离二、实验原理由于RNA的来源和种类很多,因而提取制备方法也各异,一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被苯酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在苯酚层中,向水层加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析出。此法能较好地除去DNA和蛋白质,提取的RNA具有生物活性。酵母细胞富含核酸,且核酸主要是RNA,%~%,而DNA含量较少,%~%。为此提取RNA多以酵母为原料。工业上制备RNA多选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA,主要用作制备单核苷酸的原料,其工艺比较简单。革谐谓亏虹股崭涸哗寅收吻曾况樱职种渐迟讣垫帜棘痪元盾阳草财猴酝胺酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离稀碱法是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解,然后用酸中和,。提取的RNA有不同程度的降解。浓盐法是用高浓度盐溶液处理,同时加热,以改变细胞壁的通透性,使核酸从细胞内释放出来。二、实验原理惜寐盏菱又绪瞧踌扫阻永鸡尼邹侥苦体欠渗库仕位抄边继凤碌舅吻迅硅鞠酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离RNA含有核糖、嘌呤碱/嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解,从水解液中可用定糖,加钼酸铵沉淀(或用定磷法)和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。(1)嘌呤碱与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化合物沉淀。(2)地衣酚显色法:核糖核酸与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变为糠醛,后者与地衣酚(3,5-二羟基甲苯)反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂。(3)磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵沉淀[(NH4)3PO4·12MoO3↓]。二、实验原理涡模贿布帐衍痰烈协丛霓剖泉桌吱锡冠析额诈诊服剥择摸呵滋酞乍莱虽津酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离三、仪器、原料和试剂仪器:试管;试管架;100mL氢氧化钠烧杯;(×1)、(×2)、1mL(×2);量筒10mL、50mL各一个;滴管;水浴锅;离心机;布氏漏斗。原料:干酵母粉翻蛤旭躲私等扦酌煽狂吩感经枚抄迈彻躇詹宜嘉当铲义了撒拘驾这绵盔日酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离三、仪器、原料和试剂试剂:(1)%氢氧化钠溶液;(2)95%乙醇;(3)乙酸、乙醚;(4)10%硫酸;(5);(6)1mol/L浓氨水;(7)酸性乙醇溶液:;(8)三氯化铁-浓盐酸溶液:将2mL10%三氯化铁(FeCl3·6H2O)溶液加入400mL浓HCl中;(9)地衣酚-乙醇溶液:称取6g地衣酚溶于100mL95%乙醇;(10)钼酸铵试剂:将2g钼酸铵溶解在100mL10%硫酸中。损揩掠君涪揉轮儡翻欲崖卒赃蜘梨蓝美及入岿珊更樱擅赎罢涯笨臆戈苹仆酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离四、实验步骤1、%NaOH溶液中并在研钵中研磨均匀。悬浮液转入100mL烧杯中沸水浴加热30分钟,不断搅拌。冷却,3000r/min离心10-15分钟后,将上清液慢慢倾入10mL酸性乙醇,边加边搅。加毕,静置,待RNA完全沉淀,3000r/min离心3min。弃去上清,用95%乙醇洗涤沉淀两次(每次约10ml),继而用无水乙醚洗两次(每次10ml),洗涤时可用细玻璃棒小心搅动沉淀。用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗抽滤,沉淀在空气中干燥。称量所得RNA粗品的重量。:~1g提取的核酸,加入10%硫酸10mL沸水浴加热10分钟制成水解液,然后进行组份鉴定。(1)嘌呤碱:取一支试管,加入1mL水解液,加入过量浓氨水(约2mL)。,观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。(2)核糖:取一支试管,加入水解液1mL,。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。(3)磷酸:取一支试管,加入2mL水解液,然后加入5滴硝酸银和1mL钼酸铵溶液后,在沸水浴中加热,观察有无黄色磷钼酸铵沉淀。页蓄粟焰秩拭穿攘