文档介绍：生物化学与生物物理进展
ProgressinBiochemistryandBiophysics
2009,36(9):1208~1214

水稻 U鄄Box 蛋白质在不同发育时期的表达分析*
陈浩1) 李莉云 1) 白辉2,3) 曹英豪 1) 王宪云 1) 刘国振 1,2)**
(1)河北农业大学生命科学学院,保定 071001;2)中国科学院北京基因组研究所,北京 100029;3)中国科学院研究生院,北京 100039)
摘要真核生物基因组中广泛存在 U-Box基因,其编码蛋白大部分是泛素系统中决定底物特异性识别的 E3 蛋白,其构象与
RING-finger 极其相似. U-Box 蛋白质能促进底物蛋白泛素化降解,对细胞内异常蛋白的降解及质量控制方面发挥着重要的
作用. 水稻基因组中有 77 个 U-Box 蛋白质,系统了解它们的表达可为功能研究提供数据. 制备针对水稻 U-Box 蛋白质的抗
体,了解水稻中 U-Box 蛋白质在不同发育时期的表达信息,为功能研究积累数据. 选取了 4 个水稻 U-Box 蛋白质,其共同
结构特点为 U-Box 结构在 N 端,C 端有 ARM 结构. 用计算机软件预测抗原决定簇,细菌体系体外表达、纯化 U-Box 蛋白
质的片段,免疫动物制备多克隆抗体,用 Westernblotting 检测 U-Box 蛋白质在水稻品种 93-11 苗期地上部和地下部、分蘖期
根和茎、孕穗期剑叶和幼穗、开花期剑叶和穗子、成熟期剑叶和种子中的表达,并与 EST 数据库中公布的 U-Box 蛋白质
EST 数据进行了比较分析. 体外克隆表达后,获得了纯化的蛋白质,制备的抗体特异性强,蛋白质印迹(Westernblotting)检
测可见一条明显的主带,其中 Os06g01304 和 Os12g38210 两个蛋白质的表观分子质量与预测分子质量相符,Os01g66130 和
Os08g01900 两个蛋白质的表观分子质量低于预测分子质量. 4 个 U-Box 蛋白质在水稻生长发育的不同时期或部位基本上是
组成型表达,且表达量接近. 对 NCBI 上公布的来自 274 个文库 100 万条以上的 EST 进行分析,可以看出 4 个 U-Box 蛋白
质 EST 的数量分布大致均匀,与 Westernblotting 结果揭示的组成型表达平行,与 ATPase、HSP81-3、EGF-1alpha 和
RuBisCo 等对照基因相比,U-Box 基因的 EST 数目相对很少,说明它们属于低丰度转录的基因. 选取了 4 个水稻 U-Box 蛋
白质,通过抗原决定簇预测,表达片段蛋白,制备了特异性抗体,证明了这一技术路线的可行性. 利用抗体对水稻不同发育
时期材料进行蛋白质表达谱研究,发现这些 U-Box 蛋白质呈组成型表达,与 EST 数据揭示的结果具有平行性. 所制备的抗
体也为相关功能研究,如免疫共沉淀、ChIP-on-chip、Pull-down 以及在抗病、抗逆反应中 U-Box 蛋白质的表达等,积累了
资源.
关键词水稻,U-Box,蛋白质表达,蛋白质印迹
学科分类号 Q5,Q7 DOI: .1206.