文档介绍：一一博士学位论文编号;——分类号:——论文题目:整金王佥昱锢缦堡皇胞菌苤堡:隆耐荭扭制的研究学科专业:俅布煅檎锒咸作者姓名:到饷指导教师:召匿世独答辩日期:闱荫鼓密级:公珏
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学位论文作者签名:狲之矽司独创性声明日期函。年‘月荔日本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集法律结果由本人承担。体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的
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要摘铜绿假单胞菌,粲诜欠⒔途簦惴旱姆布于自然界及医疗环境中,是引起医院内感染的重要条件致病菌。邗0防唷喹诺酮类及氨基糖苷类药物是临床常规治疗感染的关键药物,然而随着药物的广泛使用,逐渐获得了对上述药物的耐药性,进而演化成多重耐药及泛耐药菌株,造成临床抗感染治疗的失败,严重的威胁人类的健康。耐药演变机制较为复杂,可以通过多种方式取得对抗菌药物的耐药。首先,可以借助其低渗透能力的外膜蛋白、染色体编码的酶以及主动外排系统的作用而天然表现对某些种类的抗菌药物耐药;其次,在天然耐药的基础上不断通过自身基因组突变而达到对抗菌药物的适应性耐药;最后,可以通过一些耐药基因水平转移元件的参与直接获取外界耐药基因,迅速演化成耐药菌株,进一步造成耐药范围的扩大及耐药菌株的广泛传播。然而以上几点因素并非孤立存在,而是相互作用共同导致耐药菌株的产生。因此研究耐药演变机制,研究耐药传播动力,对于采取恰当的应对措施,延缓耐药菌株的产生具有积极的意义。本研究拟在前期临床分离菌株耐药表型监测的基础上,开展获得性耐药分子机制的研究,以期通过耐药表型结合耐药分子来阐明地区间耐药演变规律,为耐药菌株临床治疗及控制提供合理的理论基础。方法:收集并保存烟台、合肥及镇江地区皆毫俅卜掷氲姆侵馗碢株;菌株的鉴定采用法国梅里埃公司全自动微生物分析仪或ㄏ低常灰┪敏感试验采用瓸纸片法;药物敏感结果统计分析采用软件;整合子检测采用椒ā痭蚣觳庋粜跃杲徊讲捎肞方法扩增可变区,可变区峁一致性条带采用甊治鲆匀定可变区类型;蚣捌淇杀淝募觳獠捎肞方法,并采用猂分析来确定蚩杀淝嘈停桓春闲驼献蛹觳獠捎肞椒ā对锝写炕盎厥眨蜕虾S⒖ド锕拘兴虿庑颍糠諴产物克隆至质粒进行测序。测序结果进行拼接,拼接结果采用在线江苏大学博十学位论文
一,基与其最近的匹配序列口删.,嬖个核苷酸的突变,分别导致其编码率低%訮耆舾校云渌掷嗫咕┪锏哪鸵┞视傻偷礁咭来挝#比对分析来确定基因组结构。提取质粒,采用电化至受体菌,通过橹ふ合子的可转移性。对新的邗0坊虮湟焯錬舯应用及软件对其核苷酸及蛋白质序列进行生物信息学研究,构建进化树分析。将全编码蚩寺≈羛表达载体,转化至宿主菌,采用抗性平板进行转化株的筛选。采用琼脂稀释方法检测野生株及转化子对不同种类药物2捎贸ǚ鬯榉椒ń写置傅奶崛。⑼ü鹊绲憔劢沟缬炯觳獾电点。结果:敬文鸵┘嗖獾牧俅簿曛饕@醋宰≡夯颊叩奶当瓯%剖曳植贾饕集中在.、呼吸内科%。耐药检测结果显示,菌株对蚐耐药率高%訧和耐药.%%%%%%.、.及.。检测甓嘀啬鸵┚%中对邗0防唷被擒绽嗉班低@喑识嘀啬鸵┚.;检出嗾献友粜跃株%琁嗾献株.,未检测出整合子。发现除药物外,嗾献蛹觳庋粜跃甓圆煌掷嗫咕┪锬鸵率显著高于嗾献蛹觳庖跣跃,此外嗾献蛹觳庋粜跃的多重耐药率也显著高于嗾献蛹觳庖跣跃.,。阨基因阳性菌株有株有效的扩增出嗾献涌杀淝渲其中有晡?照献永嘈停株为非特异性扩增。发现种耐药基因盒,分别包括氨基糖苷类类耐药基因、、、⒒前防嗄鸵┗⒙让顾啬鸵┗以及邗0类耐药基因、彩,、琽、一。发现两个新的耐药基因盒:和彩,。与篗存在龊塑账嵛点突变,其中两个为无义突变,有~个导致编码氨基酸的突变;氨基酸的改变:琇、。彩,基因序列递交整合子介导铜绿假单胞菌获得性耐药机制的研究
://.∥荆袢⌒碌腛酶编号:7⑾钟赡鸵基因盒排列组成掷嘈驼献优帕蟹绞剑谰萜谓峁勾笮》直鹞#篵、矿『一籵、籦、產産稀T赑曛蟹⑾謅猘并籦蔶两种新的整合子,获取欧直鹞狫渲衋一扔,为一种从未报道的整合子类型,被://産..网站命名编号为7⑾株类整合子携带同一种耐药基因盒组合,;—一环⑾諴晖毙鳬、型整合子,共存方式为餥一一<觳獬闕基因阳性菌株,甊显示其为同一种类型,