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用不同蛋白质分析方法鉴定玉米分泌蛋白组的比较研究玮現,李春俭言牧嫌敕椒马引第卷,第期光谱学与光谱分析摘要玉米根系在生长过程中向根际分泌蛋白质类大分子物质。采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳一质谱技术,一维液相色谱一质谱联用疢和植煌ǚ椒ǘ晕蘧跫占挠衩赘捣置诘鞍捉行了分离、分析与鉴定,对执鸲ǚ椒ㄔ诜置诘鞍追治鲋械谋親鰎详细阐述和比较。结果表明,双向电泳通过锻染可以看到龅肮质点,但由于蛋白苗少,通过质谱尤法对玉米根系分泌蛋白进行鉴定;用/鉴定得到龅鞍祝挥肧技术鉴定得到了龅鞍住疢ǖ玫降牡懊湃ú砍现在用际跫ǖ玫降龅白灾校种方法的结果可以互相验证。际蹙哂懈的灵敏性,更适合对蛋白质浓度低、干扰物多的植物根分泌蛋白组进行鉴定,能够获得完整可靠的信息。关键词玉米根系分泌物;分泌蛋白组;双向电泳;籗中图分类号:文献标识码:痡...根分泌物是植物在生长过程中通过根系向生长基质中释放的种类繁多的一组物质一F渲邪ǖ头肿佣频念苄有机物和高分子最有机分泌物,如多糖,多聚半乳糖醛酸以及蛋白质,酶类等。目前对于根系分泌物的研究主要集中在小分子物质方面,如不同养分胁迫下的专一性根分泌物有机酸、麦根酸;‘浦参锵蚋适头诺睦嗷仆N镏室杂盏冀崃等。对根系分泌的蛋白质等大分子物质的研究很少。植物根系具有分泌蛋门质和特异性蛋白及酶类的能力7置诘白是一类具有重要功能的蛋白,参与植物根系胞外信号途径、形态发生、细胞凋亡、细胞分化等多种生物过程分泌蛋门组研究是蛋白质组学研究的重大挑战,这是由于分泌蛋一组不同于组织和细胞蛋白质组,其分泌量低,干扰物多,又受收集、浓缩等过程的限制【。目前阔际:已发表的关于植物分泌蛋白组的文章只有两篇,并集中在拟南芥、豌旺和油菜【薜人右吨参锓置诘鞍鬃榉矫妫缘プ叶植物分泌蛋门组的研究还是窄白。双向电泳与质谱联用是目前植物蛋门质组学研究中最常用的方法【捎谝G笊涎畲螅圆皇屎现参锓置诘量少并且干扰物质多的蛋白样本的分析鉴定。是另一种高效分离蛋门质的方法,对于样品复杂程度不高的蛋白样本,町以采用这一方法来取代或者补充双向电泳与质谱联用的鉴定结果。ǚ椒ㄊ且恢中碌牡鞍字首檠а究技术【啊<闪种或忠詋色谱分离机理的优化和组合⋯。此项技术的核心是对所获取的伞蛋白首先进行全酶切,然后对多肽混合物进行两维或多维毛细管液相色谱分离和在线串联质谱分析。在已报道的植物分泌蛋白组的研究中,采用和疢椒ǚ直鹁苣饽辖妗⑼愣购陀筒烁捣置谖镏屑定得到了龇置诘鞍籎。本文对在无菌条件下收集得到的毛米根系分泌蛋白样品,分别采用双向电泳一质谱、蚐三种方法答定玉米根系分泌蛋白。结果鳎捎肧技术得到的蛋白信息最多,并且不受蛋白浓度低,干扰物质多及难以浓缩纯化的限制。无菌玉米根分泌蛋白的收集实验材料为景米杂交种农大J笛樗玫氖约痢⑷液和器皿等用具全部高压灭菌℃,。种子经消毒在允菌条件下萌发~衩字鞲ぶ左右时,将幼苗移到有孔的塑料盘中,使根系能够穿过孔生长在琋琾泄┮荡笱ё试从牖肪逞г海┮挡恐参镉Q嫉憧7攀笛槭遥本收稿日期:——.修订日期:基金项目:国家自然科学基金项目和国家自然科学基金委员会创新群体项目资助作者简介:马玮,女,年生。中国农业大学资源与环境学院博士研究生ㄑ读O等:,
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℃过夜酶解。酶解后的胶%乙腈/~,%乙/肿,;为ヒ译妫航酶解后的肽段用在线軳低止鹊鞍酌琾于干净管中。,