文档介绍：细胞生物学实验报告细胞原代培养姓名:学号:班级:专业:同组成员:一、实验原理细胞培养是生物学和医学研究屮最常用的手段乙一,可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体秋取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来,故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。原代培养的方法:1、 组织块法在平皿屮用弯头剪把纟R织尽量剪碎,每个纟R织块小于lmm3大小。用Hanks液洗涤2—3次,白然沉淀。川吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。2、 酶消化法将lmm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20-30分钟。然后终止消化。用儿层无菌纱布过滤。取过滤液,离心BOOrpm5—10分钟收集细胞。弃上清,加入带有双抗的培养基,放入培养瓶培养。取材注意事项:取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时,要用锋利的器械,如手术刀或剃须刀片切碎组织,尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液(血块)、脂肪、坏死组织及结缔组织,切碎组织时应避免组织干燥,可在含少量培养液的器皿屮进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等,一般来讲,胚胎组织较成熟个体组织容易培养,分化低的较分化高的组织容易生长,肿瘤组织较正常组织容易培养。二、实验目的1、 理解细胞原代培养原理2、 熟悉细胞原代培养方法与过稈3、 了解细胞原代培养的应用4、 独立进行细胞原代培养操作三、实验材料手术小肓剪刀、眼科直银了、眼科弯银了、玻璃平川L、培养瓶、试管、移液管、巴斯徳吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。动物:9-12口龄的鸡胚蛋四、 实验步骤1、 购买9-12日龄鸡胚蛋。放入孵化箱屮孵养待用。2、 取鸡胚蛋一枚放入超净工作台屮,用酒精棉球擦拭鸡蛋売后,气室处擦拭两遍,用银了小心去除气室部分的蛋壳。3、 取D-hanks液按1:100加入双抗。4、 换用洁净的无菌银了揭开膜,再用洁净的无菌弯头银了取出鸡胚至灭菌的培养1UL中,并用D-hanks液冲洗鸡胚三遍。5、 用眼科剪去除鸡胚的头部、四肢以及内脏,然后用D-hanks液充分洗涤躯干部分三遍。6、 将洗涤过的躯干移至干净的培养皿,吸去多余的液体,然后用眼科剪将躯干充分剪碎(约四分Z—米粒大小)。7、 向碎块中加入一滴管胎牛血清将组织碎块切散,用滴管将组织碎块接入培养瓶中,静置一分钟,再加入5皿完全培养液,将瓶了翻转倒置后在37度培养箱屮放置27小时,待组织块微干与瓶壁贴牢示再将瓶了翻转过来,于培养箱屮培养。8、 将用过的试剂仪器等摆冋原处,将超净台打扫干净,关闭照明灯及抽风机。9、 实验后数小时后去观察组织块屮细胞迁移情况,并拍摄照片。五、 实验结果原代培养过夜麻笫二天屮午一点拍照,观察细胞迁移情况,以下迅我们小纽的实验结果。鸡胚成纤维细胞原代培养(倒置显微镜20X)—♦彳Tn. ••■、:▲鸡胚成纤维细胞原代培养(倒置显微镜20X)显微镜下可观察到鸡胚纟H•织块附近有大量细胞迁移。迁移出来的细胞呈纤维状,贴壁生长。实验结果比较理想,细胞迁移较多,大部分细胞活性较好,呈梭形附着与瓶壁上,且没有污染发生。操作时应注意的问题:原代培养要注意无菌操作,实验过程中要保持组