文档介绍：江苏科技大学
硕士学位论文
两株家蚕病原菌的分类鉴定及其部分特性研究
姓名:陶恒平
申请学位级别:硕士
专业:特种经济动物饲养
指导教师:沈中元
2011-06-02
摘要
摘要
家蚕细菌病,又称为“细菌性软化病”,是蚕病中的常见病和多发病。它的发生
往往造成蚕业上的严重损失。根据家蚕细菌病病原菌的类型可以分为家蚕细菌性败血
病、细菌性中毒病及细菌性肠道病三种。目前,研究发现对家蚕具有病原性的细菌主
要有:芽孢杆菌属(Bacillus)、肠杆菌属(Enterobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、
气单胞菌属(Aeromonas)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链球菌属(us)
和葡萄球菌属(us)。
本研究从自然发生的病蚕中分离获得 1 株对家蚕具有较高致病力的新病原细菌,
暂命名为 ST-1。该菌株菌落为桔黄色,革兰氏染色为阴性;菌株细胞呈短杆状,直形,
两端钝圆,菌体宽 ~ µm,长 ~ µm,具端鞭毛,能运动。
ST-1 菌株为好氧菌,触酶阳性;能还原硝酸盐,使明胶液化;V-P(Voges-Proskauer
reaction)、.(Methyl Red test,甲基红试验)、吲哚试验、H2S 产生试验和苯丙氨
酸反应阴性;能利用柠檬酸盐、丙二酸盐、蔗糖、葡萄糖、果糖、甘露糖和阿拉伯糖
等。结合 16S rRNA 基因序列分析结果,最终鉴定 ST-1 菌株是一株桔黄假单胞菌
(Pseudomonas chlororaphis subsp. aurantiaca)。通过注射感染 5 龄正常起蚕,初步研
究发现,该菌株能引起家蚕细菌性败血病。其致病力回归方程为 y = + ,
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半数致死浓度 LC50= ×10 CFU/mL。这是首次发现桔黄假单胞菌对家蚕有致病性。
家蚕黄僵病病原菌黄僵菌过去认为属束梗孢科(Stilbaceae),棒束菌属(Isaria),
学名为 Isaria farinasa。而家蚕球孢白僵菌(Beauveria bassiana)在最新的 NCBI 真菌
分类上,属于子囊菌门(ycota)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌亚纲
(Hypocreomycetidae)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草菌科(Cordycipitaceae)、
虫草菌属(Cordyceps)。近年研究证明,由于黄僵菌和球孢白僵菌在形态上的差异极
小,多数学者认为本病菌与球孢白僵菌(Beauveria bassiana)同属同种,只是血清型
不同。
本研究从一条自然发生的黄僵病蚕中分离获得一株家蚕黄僵菌菌株 STH1,其分
生孢子多为球形,比家蚕球孢白僵菌菌株 SHB 小。在 PDA 培养基上培养 12 d,STH1
菌株营养菌丝生长情况为 ± mm·d-1,而 SHB 为 ± mm·d-1,其生长速度
快于 STH1。培养 15 d 后,STH1 的产孢量为 ±×108 孢子/cm2,SHB 为
±×108 孢子/cm2,在α= 水平上,两者差异极显著。
对黄僵菌菌株 STH1 进行分子生物学鉴定,STH1 的核糖体内转录间隔区 ITS 序列
长为 549 bp,白僵菌菌株 SHB 也为 549 bp,两者同源相似性为 100%。以此序列构建
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江苏科技大学农学硕士学位论文
的系统发育树表明,STH1 菌株与多株球孢白僵菌(Beauveria bassiana)聚类在同一分
支。STH1 的 18S rRNA 基因序列长为 1 766 bp,其内有一段 1 866 bp 的组 I 内含子的
插入序列,能编码归巢核酸内切酶。对菌株 STH1 的 18S rRNA、28S rRNA 和基因间
间隔区 IGS 序列与白僵菌菌株 SHB 的相应序列进行同源性分析,也表明两种菌株相似
性近乎 100%。因此,我们最终认为家蚕黄僵菌属于球孢白僵菌(Cordyceps bassiana);
而菌株 STH1 是一株含有第 I 组类内含子的球孢白僵菌新菌株。
本研究通过对家蚕未知病原菌 ST-1 和黄僵菌 STH1 的系统鉴定,确立了这两种病
原菌的分类地位,也为其诊断防治等奠定了一定基础。

关键词:致病性;分类鉴定;核糖体基因;家蚕

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ABSTRACT
ABSTRACT
The bacterial di