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双酶偶联催化分光光度法测定血清次黄嘌呤光度法检测次黄嘌呤的新方法。采用豍引言112h1289光谱学与光谱分析月摘要依据黄嘌呤氧化酶和辣根过氧化物酶催化反应的特征,研究了以黄嘌呤氧化酶一辣根过氧化物酶一苯4(XOECUIIlL(HRP)7oUIIlL4(AAP)1·ǎ椒·苡趇Tris-HCL(pH环从ξ露任妫N率奔湮rnin508nln浓度的线性范围为~mmolL(-O9979)005mmolL作简单易行,测定结果准确可靠。可有效应用于普通实验室和常规临床血液生化检测。关键词黄嘌呤氧化酶;辣根过氧化物酶;次黄嘌呤检测;分光光度06573ADO!103964jissn10000593(2008)09-216904次黄嘌呤是核苷的代谢产物,其氧化产物尿酸和氧自由基具有重要的生理及病理功能。黄嘌呤氧化酶是嘌呤代谢途径中的限速酶,催化次黄嘌呤先氧化形成黄嘌呤,再进一步氧化生成尿酸和过氧化氢’。目前次黄嘌吟浓度测定主要是选用反相高效液相色谱法ㄡ襧,由于黄嘌呤和次黄嘌呤的化学结构和性质差异微小,在条件下难以达到有效分离,而且还易受到其他核苷类化合物的干扰。酶催化反应具有反应底物专一性强的优点,且在多酶反应体系中,非限速步骤的反应速率不影响酶促反应(HRP)(XO)E9]反应新体系生成氧化型色素,定量检测血清和组织中的次黄嘌呤浓度。该方法简便易行,结果准确可靠。可应用于常规临床检测的自动生化检测仪及普通实验室的可见分光光度仪上进行定量分析。主要试剂及仪器紫外一可见分光光度仪樟一,恒温水浴锅112R)(Hi-。黄嘌呤氧化酶.~,,辣根过氧化物酶~,上海双向西巴斯科技有限)4-(AR)(AR)(99Flu-ka)Tris(BR)HCL(AR)妹判侣〈锸约劣邢薰。实验方法配制反应显色液:话被蔡姹攘籄,·槐椒籘撼逡·。;叠氮钠,;辣根过氧化物酶3从ο陨海琁黄嘌呤氧(xanthine琗酶液张ǘ任.,及一定量的次黄嘌呤琀溶液。混378rain2终止反应,立即冰水冷却。以不加的反应体系作为参比,测定其可见吸收光谱。样品的前处理5September200812140362·.甋AAP)1,甇pemxidaseUmL,收稿日期:薅┤掌冢—基金项目:工业生物技术教育部重点实验室基金项目透=ㄊ∽匀豢蒲Щ鹣钅资助作者简介:李忠琴,女,年生,江南大学讲师:畉*..,—12322)032,U
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+2rain508光谱学与光谱分析第卷室温静置rmin-15;取出上层的血清,分装,立即冻存℃,备用。组织标本的采集与处理:取新鲜鼠肝组织,充分匀浆后离心取上清液,加入%三氯醋酸,混匀沉淀蛋白,叫高速离心,取上清液进行检测。双酶偶联测定法原理黄嘌呤氧化酶在催化次黄嘌呤氧化的反应过程中,每1t00111toolHzQ4物7从μ逑抵蠬和酶充分过量的条件下,根据生成的红色化合物在可见光范围内测定的吸光4-,ep}lyp01xa_MJlif_吸收光谱按节实验方法依次加入除次黄嘌呤以外的试剂,以缓冲液为参比,从扫描该体系的1l300个强吸收峰。加入反应后再扫描体系的吸收光谱,从曲线2450650nlil1508nrn含量检测波长,可降低干扰,提高检测灵敏度。酶催化反应动力学性质按节实验方法,分别反应,,,,,2HX逐渐增大。至后,吸光度值达到最大,用表示。用一级动力学方程描述吸光度与