文档介绍：东南大学
硕士学位论文
体外构建人工复合皮的动物实验研究
姓名:梁志为
申请学位级别:硕士
专业:外科学(整形外科)
指导教师:谭谦
20040601
体外构建人工复合皮的动物实验研究中文摘要研究生姓名:梁志为导师姓名:谭谦【目的】体外构建一种含有角质形成细胞和血小板衍化生长因子基因转染的成纤维细胞的复合皮肤,并将此种复合皮移植到动物皮肤缺损模型,观察创面愈合的效果。【方法】在体外利用已制备的无细胞异种真皮基质、培养的角质形成细胞和基因转染的成纤维细胞构建三种类型复合皮:停嘌慕侵市纬细胞尴赴碚嫫せ:停嘌慕侵市纬上赴无细胞猪真皮基质嘌某上宋赴籆型,培养的角质形成细胞尴赴碚嫫せ质蜃H镜某上宋赴。通过相差显微镜观察、组织切片染色等方法进行检测。分别将三型复合皮分成、椋卸镆浦彩验,观察皮片存活率、创面收缩率、真皮血管化程度等,并与单纯角质形成细胞膜片移植组组陀梅彩苛稚床几哺堑亩哉兆进行比较。【结果】体外培养后,透春掀旧允居层以上的角质形成细胞,有基底膜形成,并有轻度角质化。移植术后,与其他各组相比,两组成活率高,复合皮与创面边缘融合较好,与基底贴附紧密,尤以榍榭龊茫篍组呈结痂愈合。移植后,榇疵嬗虾茫砻婀饣越虾茫鼓Σ列郧浚缩不明显。橛虾蟪苫畈晃榷ǎて V蚀啵砻娌还饣鼓Σ列圆睿有部分创面愈合后再度形成创面,各组均无毛发生长。创面收缩率:两组收缩最为明显,组次之,槭账踝钌/.4婊盥剩撼鼵、阶榧洳异显著外篕,余各组间存活率无显著性差异。但与其他各组相比,楦合皮完全存活数较多,未存活数少。血管化情况:移植后,檎嫫で巢隳诳见较多新生毛细血管长入,,但槊秆9苁悦飨愿哂贏、组;移植后,各复合皮内毛细血管数差异不显著。【结论】用角质形成细胞和基因传染的成纤维细胞在无细胞异种真皮上培养来构建复合皮,经组织学检查、动物移植实验,证实构建的复合皮具有良好的结构,能够迅速血管化,创面修复后具有良好的形态。【关键词】无细胞真皮基质;复合皮:血小板衍化生长因子;组织工程
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蛳日期:唬赫迹东南大学学位论文独创性声明东南大学学位论文使用授权声明研究生签名导师签本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的税明并表示了谢意。东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外,允许论文被查阅和借阅,可以公布ǹ论文的全部或部分内容。论文的公布ǹ授权东南大学研究生院办理。
缩略词表无细胞异种真皮基底膜培养的自体表皮细胞膜片培养的角质形成细胞中性蛋白酶’牧糆培养基胚胎干细胞嘌成纤维细胞胎牛血清成纤维细胞生长因子人脐静脉内皮细胞白介素一角质形成细胞角质形成细胞生长因子磷酸缓冲液血小板衍化生长因子逆转录一聚合酶链式反应转化生长因子血管内皮生长因子无细胞异种真皮基质,珺/痵狝缩略词’,:現,,,,一,·,—甌—
绪言皮肤是人体最大最重要的一个器官,约占人体体重的%,是维持内环境稳定和阻止微生物入侵的屏障。各种创伤缟丈引起大面积皮肤缺损后,可导致体内水分、电解质和蛋白质等大量丢失,破坏人体内环境稳定,加上微生物侵入引起局部和全身感染,从而出现各系统复杂和严重的病理生理变化,最终导致病人的死亡。因此,尽快地修复皮肤缺损仓妫指雌渖砉δ芤恢笔茄芯空吲Φ胤较颉D壳捌し羧彼鸬闹瘟浦要依靠自体断层皮片的移植,然而,大面积皮肤缺损患者往往存在自体皮源不足的问题,而且取皮后供体部位愈合需要一定时间,并可能引起感染、功能、或美容方面的问题。皮肤组织工程技术的出现为解决这些问题提供了一种满意的方法。自从闞和首次大规模培养人表皮细胞获得成功后,培养的自体表皮膜片珻还惴河τ糜诹俅玻⒈恢っ魇悄壳拔一可用来修复大面积皮肤缺损的自体组织。然而,这种表皮细胞膜片由于缺乏真皮成分的支持,移植后存在易收缩,创丽接受率低,愈合后皮肤不耐磨,易起疱等缺点。另一方面,研究者也对各种真皮替代物进行了研究,如:无细胞胶原海绵、、无细胞真皮基质等,单纯真皮替代物虽然可达到较为理想的创面暂时覆盖的目的,但由于缺少表皮的防护,使感染机率大为升高,且易造成体内水与电解质代谢紊乱,因此往往需要自体皮片来覆盖。理想的组织工程皮肤应为包含表皮与真皮的复合皮肤,如,这种皮肤表皮层下增加真皮成分,可有