最低抑菌浓度(MIC)测定.doc

文档介绍：(MIC)测定菌悬液的制备刮取18~20小时的培养物,在管壁上充分研磨后混悬于1ml缓冲液中,借助比浊仪,调菌悬液浓度至104/ml,于1小时内用多点接种仪接种(放置室温应大于25℃)。MIC测定抗菌药物储存液制备抗菌药物称量及配制:根据各抗菌药物的纯度称取,以当前所用抗菌药物为例。抗菌素纯度称量(mg)加溶剂(ml)储存液浓度(mg/ml)四环素100%%%:每管200ml,-70℃可保存一年。抗菌药物工作液制备青霉素:管号原液011**********浓度()取量(ml)200→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200溶剂(ml)200200200200200200200200200200200200200四环素:管号原液01浓度(mg/ml)32001600800取量(ml)200→200→200溶剂(ml)200200200大观霉素:管号07654321浓度(mg/ml)2560012800640032001600800400200取量(ml)200→200→200→200→200→200→200→200→溶剂(ml)200200200200200200200200头孢曲松:管号原液0**********浓度(μg/ml)(μl)40→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200溶剂(μl)360200200200200200200200200200200200环丙沙星:管号原液0131211**********浓度(ug/ml)(μl)200→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200→200溶剂(μl)200200200200200200200200200200200200200200200抗菌药物梯度培养皿的制备培养皿编号:按各抗菌药物浓度编号。将配制好的各抗菌药物工作液150μl加到各培养皿中,与15ml50℃预温的培养基充分混匀,平放在超净台内,半开培养皿盖至培养基凝固后,用塑料袋密封保存于4℃冰箱。菌悬液接种与培养多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理,其它配件用酒精消毒处理;使用前必须确认完全烘干。按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿,接种菌后置超净台内直至菌悬液渗入。置35℃~36℃、5%~10%CO2一定湿度的环境中培养。记录放置时间。培养18~24小时观察结果。结果判读观察细菌生长情况:记录结果读取时间。在适宜的光线下,观察对照培养皿的菌落生长情况,并对所有菌株进行初步鉴定(涂片染色和氧化酶试验)。比较观察对照平皿和抗菌药物平皿,进行判读:接种点内有1个以上菌落或呈菌苔状为生长;接种点内无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。MIC判读与记录:MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度,表示单位为mg/ml。记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况,在《WHO参考菌株及MIC实验结果记录表》用(+)表示生长,(-)表示无生长。每批实验结果必须由另外一名技术人员复读、签字,以确保结果的准确性。参考菌株的判读:本次测定的参考菌株MIC值在标准MIC值范围内或在标准MIC值±1个浓度范围内表明本次试验有效。本次测定的参考菌株MIC值超出上述范围则表明本次试验无效,需重新配制抗菌药物平皿和测定。b-内酰胺酶测定纸片酸度定量法将一小片滤纸置于空平皿中:让滤纸吸足青霉素液(++5g无缓冲剂的结晶青霉素):用接种环将10~20个菌落涂到滤纸上,涂膜直径约为5mm,35℃孵育30分钟:观察结果:产生b-内酰胺酶的淋球菌使滤纸颜色由紫变黄。产色头孢菌素法将头孢硝噻吩纸片置于空平皿中,用接种环将菌落涂到纸片上,3分钟内观察有无颜色变化,变红者为b-内酰胺酶阳性。:实验人员:核读人员:①青霉素(P),②四环素(T)及b-内酰胺酶:平皿号P1P2P3P4P5P6P7P8P9P10P11T1b-内酰胺酶浓度(mg/ml)