文档介绍：中文摘要关键词:;籹;信号转导;免疫荧光;易謇野彼峒指导教师酶目的研究9痰鞍證隒在细胞上的定位及在赴藕抛5纪分械南嗷プ饔茫蕴突变型狽籆三种质粒进行扩增并酶切鉴定,同样转染细胞,检测各转染组硕士研究生姬静庖哐高美华教授讨向赴诖ǖ菪藕诺南喙鼗啤方法应用细胞免疫荧光技术,通过激光共聚焦荧光显微镜系统对、亩ㄎ唤辛朔治觥利用扇偶际酰杓普攵訡基因的寡核苷酸序列,克隆至线性化的载体中构建—刈橹柿2⒔屑ā2捎玫缱H痉椒ㄗH綣赴ü庀晕⒕倒鄄霨基因表达,并行—琜检测转染细胞中谋泶铩=玴猻、狽籆、白的表达。涣4碳は赴螅瑆检测各组一并狥表达量;检测细胞增殖;觳庀赴锨逯凶越樗乃健结果激光共聚焦结果显示:细胞静止时,肿拥阕淳奂谀ど希珻肿庸惴悍植迹凰孀细胞活化,倭康纳⒃诜植迹鳦泶镌龆嗖⒌阕淳奂猻重组质粒经菌液⑾拗菩阅谇忻杆盖蟹治龊虳测序鉴定正确。各转染组可表达绿色荧光蛋白,转染一—刈橹柿5腏赴蠧基因表达量明显低下其他各组。选取柿=行后续检测结果:与未转染组比较,在基因与蛋白水平,干扰组泶锛跎伲弑泶镒楹屯变组泶镌黾印交联刺激细胞后,与朱转染组比较,干扰组和突变组细胞增殖快,一分泌增多,一襩—龆啵槐渥楸浠飨裕桓弑泶镒橄赴蛴胫喾础结论可借助棕榈酰基团使肿恿姿峄蛳赴诖ǖ菀种菩藕牛鹣赴谙喙胤肿的一系列变化,为探讨与赥细胞信号转导通路中相互作用及谛藕抛5蓟制奠定基础。
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目录引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯.·技术流程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯.·第一章材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.载体的选择⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯⋯.⋯⋯,..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...细胞复苏与培养传代⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.细胞冻存⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.正常人外周血淋巴细胞的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.激光共聚焦显微镜观察细胞内与亩ㄎ弧质粒构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯..靶基因序列的设计⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..寡核苷酸链退火成双链⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.柿5南拗菩运盖杏虢夯厥铡柿5奶崛..碇悄旱缬尽空质粒的限制性内切酶双酶切⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯目的基因与目的载体的连接⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯.连接载体转化慵惺芴蟪Ω司⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.刈樵靥錺猻的鉴定、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...重组载体的庑蚣ā⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料方法重组载体的菌液及....
成功构建—刈橹柿!从Αぁ⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.·.髦柿5睦┰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..细胞电转染⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯方法检测各组谋泶铩单克隆抗体交联刺激⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯....赴怼觳庀赴鲋场觳庀赴蠭姆置诹俊平⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯.统计学分析.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..细胞的培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.激光共聚焦显微镜观察癈的定位及相互关系⋯⋯⋯⋯..柿!柿5乃盖小—刈橹柿!.—刈橹柿5募āā—刈橹柿5拿盖屑ā—刈橹柿5牟庑蚪峁细胞电转染⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯检测虻谋泶铮检测鞍椎谋泶铮重组质粒酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯功能检测,⋯⋯.⋯⋯..⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯⋯⋯.⋯.细胞电转染⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯肿釉诨蚝偷鞍姿降谋泶铩!!检测处理后细胞的一和狥蛋白的表达⋯.觳釰赴鲋场考觳釯含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.......———————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————一一一
第三章讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯综述的参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯攻读学位期间的研究成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯学位论