文档介绍：山东医药年第罄第
刺参黏多糖对细胞表达及细胞
周期的影响
张笑雪,于壮,宋扬
青岛大学医学院附属医院,山东青岛;青岛大学营养学研究室
摘要目的研究刺参黏多糖对体外培养的细胞增殖细胞核抗原表达及细胞周期
的影响。方法用免疫组织化学法测定对体外培养的细胞作用后的表达水平,用流式细胞术
测定细胞周期变化,并与甲氨蝶呤比较。结果、均可使体外培养的细胞表达水平
明显降低,还可以使细胞周期发生明显的变化,
.,而、期的细胞比例比未干预组则明显减少.。结论有下调细胞表达水
平,阻滞细胞周期的作用。
关键词刺参黏多糖;甲氨蝶呤;细胞;细胞增殖;细胞周期
中图分类号文献标识码文章编号.

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刺参酸性黏多糖是由刺参体壁提取的胎牛血清杭州四季青;一恒温培养
一种动物酸生黏多糖⋯。药理试验证明,具箱;酶标仪;人增殖细胞核抗原—
有广谱抗肿瘤、抗凝血及增强机体免疫功能等活试剂盒中山生物工程有限公司;显
性。年月~年月,本实验选择微镜,日本;流式细胞仪—
细胞作为研究对象探讨了抑制肿瘤细,美国。
胞增殖的作用。. 细胞系及细胞培养人宫颈癌细胞系
材料与方法细胞常规培养于含%胎牛血清、/青霉素
. 材料宫颈癌细胞系青岛大学医学院微和链霉素的培养基中,置,
生物实验室赠;由中国海洋大学医药学院提%培养箱中培养孵育—后用.%
取;上海华联制药有限公司/支;四甲基消化传代,选对数生长期细胞进行实验。
偶氮唑蓝;培养基、胰蛋白酶公司; 。免疫组织化学技术检测表达①将清
洁盖玻片放人孔培养板,取对数增殖期细胞接种
于孑培养板,细胞数为×/,【,%
基金项目山东省科技厅资助项目。饱和湿度孵育,待细胞完全贴壁后开始加药。
东医药年第卷第期
②将细胞分为组和组分别加药, 表、不同浓度细胞
每组从零开始设个浓度。组的浓度依次为表达水平的比较±
、.、、,组的浓度依次为:、.、
.、./,每个浓度设个复孔。③共同培养
后,取出盖玻片,置于丙酮液,风干,放于
℃冰箱中密封保存备用。准备染色前先室温平衡注:与同组浓度比较,‘,.
冷藏保存的切片。④切片置于.% 的—. 、对细胞的细胞周期影响
中。室温,./,洗×次。不同浓度、组细胞期细胞减少,
⑤滴加%的,室温,./,洗。~期细胞增多。见表。
×次。⑥滴加正常山羊血清,℃,, 表不同浓度、对细胞的
细胞周期影响% 。±
甩干不洗。⑦滴加抗体,℃过夜。./,
洗×次。⑧滴加生物素标记的第二抗
体,℃,孵育,.//洗×
次。⑨滴加辣根酶标记的链霉卵白素,℃孵育
,./,洗×次。⑩显色:滴加
,室温显色,镜下控制反应时间。蒸馏水冲洗,
梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片;设立阴
性对照,以代替一抗,其余步骤同上。注:与对照组比较,.
讨论
. 碘化丙啶染色流式细胞术分析细胞周期变
真核细胞周期中的个时期、、、期中,
化①取对数增殖期细