文档介绍：维普资讯
· · 试验研究广东畜牧兽医科技年第卷第期
体细胞克隆的小鼠胚胎在附植前后发育的研究
彭礼繁,罗光彬,。,陈自洪。
.沈阳农业大学动物胚胎工程实验室,沈阳辽宁;.美国西北大学医学院儿科系,芝加哥
美国:.广西大学动物繁殖研究所,广西南宁
摘要:采用成年小鼠的卵丘细胞核、胎儿成纤维细胞作核供体细胞来进行核移植,研究小鼠卵母细胞
的去核程序和影响重构胚附植前发育的激活条件;随后将重构胚与供体细胞系共培养后获得囊胚阶段的小
鼠重构胚,并将其移植到受体鼠体内后获得了%克隆胚胎。结果表明,小鼠卵母细胞质能够进行重编程
来支持旱期的胚胎发育。
关键词:克隆;胚胎培养;核移植;小鼠
中图分类号:. 文献标识码: 文章编号:———
目前,大多数研究在胚胎干细胞中采用同源购自大连医科大学实验动物中心,合格证号:
受体来进行基因敲除,以研究其基因功能,。创辽—;普通级近交系雌鼠,本实验
造功能突变性缺失的同源受体,在大鼠中已普遍室饲育。’
使用,但在其他哺乳动物上还没有得到应用,尤其。. 主要仪器设备拉针仪—、锻针仪
是在小鼠上。先天性突变的小鼠是人类疾病的、电融合仪一、芯入哨子管
重要模型。使用小鼠作为动物模型来进行的基,均为日本生产;荧光显微镜
因研究, 已经在活跃的染色体组织中得到了证实一、生物显微镜附显相系统

。小鼠模型基因研究中的主要限制性因素是,难一、实体生物显微镜—,均为
以制造出功能突变性缺失的同源受体基因克生产。培养箱,香港;倒置
隆。迄今,小鼠的胚胎干细胞还无法产生出生殖显微镜及显微操作系统,德国公
系嵌合体,因此就无法进行基因敲除。司;电子天平,德国赛多利斯公司;生物
目前,用胚胎干细胞来生产克隆后代,主要是超净工作台一,中国江苏苏净集团安泰公
将培养过的细胞核转移入去核的卵母细胞中,并让司;酸度计——,美国公司;多
这种重构胚在体外发育嘲,进而获得经过基因修饰管架自动平衡离心机一,湘仪离心机有限
的克隆动物。导入突变基因的供体核经核移植也能公司; 立式自动电热压力蒸汽灭菌器
得到具有相同的突变基因的后代。在一些物种中提一,上海申安医疗器械厂;自动三重纯
供供体核的细胞通常是经过培养的细胞,用这种方水蒸馏器一,上海亚荣生化仪器厂。
式可以生产基因敲除克隆动物嘲,而要达到这个目.。药品与试剂、、、透明质酸酶、
标首先要生产出核移植小鼠。已报道的小鼠核移植胰酶、、缓冲液、胎牛血清、
多采用小鼠胚胎中卵裂球的细胞核忉,随着小鼠基高糖、、聚乙烯吡咯烷酮等,均
因敲除技术的发展,目前又采用其他大量的细胞或购于公司。孕马血清促性腺激素,人
培养过的细胞来生产克隆动物个体。绒毛膜促性腺激素,购于宁波第二激素厂。
本试验采用成年小鼠的卵丘细胞核和胎儿成其它试剂均购于沈阳化学试剂厂。
纤维细胞来进行核移植,经体外培养使这些重构. 方法
胚从卜细胞阶段发育到囊胚阶段。。. 卵母细胞的收集小鼠自由采食和饮
材料与方法水,控光光照/,经一周的适应性饲养后,
. 材料腹腔注射/只,后注射/
.. 实验动物~周龄昆明白系雌鼠, 只,进行超数排卵。于注射后.~处死
收稿日期:——
维普资讯
体细胞