文档介绍：摘要由黄单胞菌水稻致病变种(Xanthomonas oryzae ,简称xoo)弓I起的水稻白叶枯病是世界上重要的水稻细菌性病害之一。Xoo在与水稻互作过程中需要一系列信号调控网络机制调控对寄卡植物的侵染。然而,这些信号调控机制对细菌毒性的确切功能尚不完全清晰。研究表明, 环鸟苷二磷酸(e-)是广泛存在于各类细菌中的第二信使,调控细菌多方面的生物学功能。。前期研究表明,,在Xoo中调控了胞外多糖产生、生物膜形成、菌体沉降、H202敏感性和对水稻的致病性等性状。然而,对Clpxoo的作用机理尚不明了。因此,MP结合结构域和DNA结合结构域(HTS)进行了初步的功能解析,主要开展了以下工作: (1)利用表达载体pET28a(+)成功诱导表达了Clpxoo蛋白,并通过Ni2+离子交换树脂进行蛋白纯化,得到了纯度较高的非变性目的蛋白。(2)采用qRT-PCR方法,定量测定Aclpxoo巾调控鞭毛运动性的654因-了编码基因rpoNxoo 及内聚葡糖酶编码基因engXCAxoo的转录本表明,Clpxoo正调控rpoNxoo和engXCAxoo的表达。采用生物信息学方法,预测其启动子区域可能具有Clpxoo结合的保守序列,分别在rpoNxoo和 engXCAxoo距翻译起始位点上游187 bp和318 bp处,二者序列相似性分别为60%和80%。采用生物素化学发光凝胶阻滞实验(EMSA),检测Clpxoo蛋白与rpoNxoo,engXCAxoo启动子区及大肠杆荫中Crp所结合的特异寡核苷酸片段H的相互作用,结果发现Clpxoo蛋白与上述基因启动了片段无珏兀滞现象发生,表明Clpxoo与上述基因启动了区无结合作用,推测Clpxoo对它们起间接调控作用。(3)通过等温滴定量热实验0TC),—GMP的反应热量进行了初步监测。,两者之间有相互作用,。(4)利用小同的表达载体,对与c- 01019、PXO 03877及 PXO一04753进行了原核表达。利用pET28a(+)原核表达了PXO一01019蛋白,用pET32a(+)和 pGEx-4T-l原核表达了PXO 03877及PXO 04753蛋白,为下一步对这些蛋白进行功能研究奠定了摹础。总之,奉研究初步阐明了Clpxoo蛋[J具有与小分子第二信使c-,并且调控了下游基因的表达。 MP结合结构域,DNA结合结构域,ITC,EMSA Abstract Bacterialblight ofricecausedby Xanthomoans oryzae (Xoo)is one ofthemostserious diseases works regulate bacterialinfection tothehostplant during theinteractionof Xoo ,until recently,little was known about thefunction of works tovirulence nucleotide signaling molecule cyclicdiguanosine monophosphate(C-di—GMP)has recently emerged as awidely conserved second messenger implicated in theregulation ofvarious biological functions labhasdone some basic work on understanding theC-di—GMP signaling pathway and its functions in work indicated transcriptionai regulator Clpxoo,a putative C-di·GMP receptor’regulated haride (EPS)production,biofilm formation,cellprecipitation,sensitivity toH202 andpathogenicity on rice, ,Clpxoo’S fun