文档介绍：南华大学
硕士学位论文
DADS作用HL-60细胞后对细胞凋亡和周期相关基因表达的影响
姓名:林敏
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:苏琦
20070501
原创性声明

本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工
作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的
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含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共
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作者签名日期: 年月日

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作者签名: 导师签名: 日期: 年月日
DADS 作用 HL-60 细胞后对细胞凋亡和周期相关基因
表达的影响

研究生:林敏
导师:苏琦教授

中文摘要

第一部分 DADS 诱导 HL-60 细胞增殖抑制和凋亡作用
目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)对人白血病细胞 HL-60 的增
殖、凋亡及其周期分布的影响。
方法:通过绘制不同浓度 DADS 作用后 HL-60 细胞生长曲线和计算细胞群体倍
增时间,研究 DADS 对 HL-60 细胞增殖抑制作用,并利用流式细胞仪检测细胞
周期分布。采用形态学观察、PI 单染和 Annexin Ⅴ/PI 双染流式细胞术以及 DNA
琼脂糖凝胶电泳等方法来证实细胞凋亡。
结果:(1) 生长曲线表明,60µmol·L-1 和 120µmol·L-1 DADS 对 HL-60 细胞增殖抑
制作用明显(P<)。(2) 常规培养的 HL-60 细胞群体倍增时间为 ,
60µmol·L-1 和 120µmol·L-1DADS 作用后细胞群体倍增时间分别延长至和
(P<)。(3) DADS 抑制 HL-60 细胞增殖与周期阻滞有关,15µmol·L-1
-1 -1
和 30µmol·L DADS 主要将 HL-60 细胞阻滞于 S 期和 G2/M 期,60µmol·L 和
-1
120µmol·L DADS 主要将 HL-60 细胞阻滞于 G1 期(P<)。(4) PI 单染流式细
胞术显示,15、30、60µmol·L-1 DADS 作用 HL-60 细胞 24h 后,细胞凋亡率分别
为(±)%、(±)%、(±)%,呈浓度依赖性增加(P<)。
(5) Annexin Ⅴ/PI 双染法显示,60µmol·L-1 DADS 作用 4、8、12h 后,细胞凋亡
率分别为(±)%、(±)%、(±)%,具有明显的时间
依赖性(P<)。(6) 60µmol·L-1 DADS 作用 24h 后,DNA 琼脂糖凝胶电泳可见
特征性的阶梯状条带,光学显微镜观察到细胞体积缩小,核浓缩和凋亡小体形成
1
等典型的形态学改变。
结论:
1. DADS 可明显抑制 HL-60 细胞增殖,并与细胞周期阻滞有关。
2. 60µmol·L-1 DADS 能够有效诱导 HL-60 细胞凋亡。
关键词:二烯丙基二硫;白血病;HL-60 细胞;增殖;周期;凋亡

第二部分 DADS 作用 HL-60 细胞后相关基因表达谱分析
目的:应用基因芯片技术获得 DADS 作用 HL-60 细胞后相关基因的表达谱,筛
选出差异表达基因。从基因水平探讨 DADS 对 HL-60 细胞的作用机制。
方法:提取 60µmol·L-1DADS 作用 4h 后的 HL-60 细胞和未处理 HL-60 细胞中的
RNA,反转录成 cDNA 后进行生物素标记,与 Superarray 公司的含有 288 个基
因的人细胞凋亡和周期基因芯片杂交,GEArray 软件对结果进行分析,筛选出
DADS 作用后差异表达显著的基因,并采用 RT-PCR 和 Western blot 技术验证芯
片结果可靠性。
结果:(1) 基因芯片检测发现,DADS 作用后有 6 个基因表达显著上调,包括:
Fas-L、TRAF1