文档介绍：南华大学
硕士学位论文
CypA对氧化应激活化血管平滑肌细胞ERK1/2的的调节作用
姓名:曹春芽
申请学位级别:硕士
专业:药理学
指导教师:黄红林;廖端芳
20070501
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作者签名: 日期: 年月日

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作者签名: 导师签名: 日期: 年月日
CypA 对氧化应激活化血管平滑肌细胞 ERK1/2 的调节作用
研究生:曹春芽
指导教师:黄红林教授
廖端芳教授
(湖南衡阳南华大学药物药理研究所,湖南衡阳 421001)
摘要
目的:探讨氧化应激诱导因子亲环蛋白 A 对大鼠胸主动脉平滑肌细胞氧化应激
激活的细胞外信号调节激酶 1/2 的作用。
方法:贴块法培养 SD 雄性大鼠胸主动脉平滑肌细胞,取 4~10 代,分别用 1
µmol/L 的 LY83583 处理不同时间,用噻唑蓝(MTT)比色法和细胞计数法检测
细胞增殖;收集总蛋白,蛋白质免疫印迹(Western-Blot)检测细胞内亲环蛋白
A(CypA)、细胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)和磷酸化的细胞外信号调节激
酶 1/2(p-ERK1/2)在细胞内的表达变化。用 CypA 的阻断剂环孢霉素 A(100
nmol/L)或溶媒(DMSO)预处理 30 min,再用 1 µmol/L 的 LY83583 处理平滑
肌细胞 120 min,或用 1 µmol/L 的 LY83583 处理 120 min 之后再用 100 nmol/L 的
环孢霉素 A 治疗后处理 30 min 以及空白对照组五组,分别收集总蛋白、可溶性
蛋白、不溶性蛋白和核蛋白,Western-Blot 检测 CypA、ERK1/2 和 p-ERK1/2 的
蛋白变化;用 CypA 的一抗免疫沉淀五组总蛋白,Western-Blot 观察其与 ERK1/2、
p-ERK1/2 的结合;用流式细胞仪分析细胞周期分布特征;免疫荧光观察 p-ERK1/2
的核转位。
结果:用 LY83583 处理大鼠血管平滑肌细胞不同时间后,MTT 比色法和细胞
计数法检测表明 LY83583 诱导血管平滑肌细胞增殖,作用强度呈时间依赖性;
Western-Blot 结果显示在 10 min 和 120 min 时 ERK1/2 出现了 2 个活化高峰,细
胞内 CypA 也在 120 min 时出现高峰;免疫沉淀结果显示氧化应激后 CypA 与
p-ERK1/2 结合增加; Western-Blot 检测发现,氧化应激增加可溶性和细胞核内的
p-ERK1/2 的量,减少不溶性的 p-ERK1/2;流式细胞仪分析提示氧化应激后 S 期
细胞比例增高,而 G0/G1 期细胞比例降低;免疫荧光结果显示氧化应激促进
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p-ERK1/2 的核转位,100 nmol/L 的环孢霉素 A 预处理和治疗后处理都能阻断
LY83583 的这些效应。
结论:氧化应激诱导因子 CypA 氧化应激后进入细胞内,通过与 ERK1/2 结合,
形成一个 CypA 和 ERK1/2 的复合物,促进 ERK1/2 的活化、溶解和核转位,从
多种途径增强 ERK1/2 的激活信号,促进血管平滑肌细胞的增殖。
关键词:亲环蛋白 A;氧化应激;细胞外信号调节激酶 1/2;血管平滑肌细胞;
环孢霉素 A

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The regulation of Cyclophilin A on extracellular
signal-regulated kinases 1/2 activated by oxidative stress in
vascular smooth muscle cells
ABSTRACT
Aim Phosphorylation and nuclear transloc