文档介绍：第一军医大学
硕士学位论文
NICU常见致病菌寡核苷酸阵列检测方法的研究
姓名:沈德新
申请学位级别:硕士
专业:儿科学
指导教师:封志纯
20040605
中英缩略词对照表
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⋯常见致病菌寡核苷酸阵列检测方法的研究硕士研究生:沈德新导师:封志纯教授虏⌒院椭滤佬缘闹匾R蛩亍D壳罢锒现虏【姆椒ǎ主要是在细菌培养和分离病原菌基础上依据血清学、形态和生化鉴定进行诊断。这种方法最大的弊端是培养和鉴定细菌耗时长,无法及时为临积累。更有甚者,一些苛养菌难以培养或者不能被培养出来,根本无法提供病原菌信息。因此,早期、快速、简便、敏感地检测临床致病菌,是目前亟待解决的问题。本课题拟以Q芯慷韵螅荚诮⒖速检测多种临床致病菌的寡核苷酸阵列方法。椒╙通过对种常见细菌的蛄斜冉戏治觯页鲆欢两端高度保守、中间相对变异的序列。依据其保守序列设计一对通用引物,用于扩增细菌康男蛄小R谰菹喽员湟烨虻男蛄猩杓瞥见的种病原细菌的特异性探针,阵列于带正电或负电的尼龙膜上,与通用引物的镌咏唬耘卸涎局杏形薮觳≡妇捌渲掷唷同时探索探针固定的最佳方法,优化从μ跫肮押塑账嵴罅异性和杂交效率。采用株标准菌及暌吧怨押塑账嵴罅薪姓媸敌浴⒖煽性及价值评价,其指标包括:灵敏度、特异度、指数、似然比、收集莞骼嗔俅惭荆冉洗诚妇嘌凸押塑账嵴罅屑觳方法对种致病菌检出率的差异。采用配对计数资料的卡方检验及凳煅榻型臣蒲Т怼峁鸧建立了以6韵蟮墓押塑账嵴罅屑觳夥椒āI杓频摘要康腯细菌感染是新生儿重症监护病房床提供抗生素选择依据,而盲目应用不恰当的抗生素可造成病原菌抗性杂交条件,改进杂交液的配制,以提高寡核苷酸阵列杂交的灵敏度、特预测值等。一
常见致病菌的检测,均能特异地与其检测细菌的通用引物杂交,蜕明探针具有很强的特异性。寡核苷酸阵列检出槊舳雀撸通过对寡核苷酸阵列建立方法的优化筛选发现:化学固膜法优于加尾加紫外交联法;改进后的杂交液与传统杂交液相比使杂交时间由缩短为辉咏晃露瓤刂圃嬉嬷湓咏恍Ч罴选L秸氲隳づ度以猯钗J涤茫辉ぴ咏挥敕窬谀崃ど媳硐殖鼋锨逦对寡核苷酸阵列检测方法进行评价,%,指数为粜运迫槐任阴性似然比为粜栽げ庵滴%,.,两种方法吻合度良好采用寡核苷酸阵列和传统细菌培养方法分别检测萘俅惭罚良好.;对于苛养菌感染,寡核苷酸阵列检出率明显高于传统细崧踋以6韵蟮墓押塑账嵴罅芯哂薪虾玫闹质艏力。可以简便、快速、特异地检测常见的种致病菌。从接到样品到判读出结果,整个过程大约需要。寡核苷酸阵列是快速诊断常见感染病原菌的有效方法,适合临床检测的推广。【关键词】寡核苷酸阵列;病原细菌;快速诊断:通用引物能有效扩增出常见的细菌目的序列;寡核苷酸阵列应用于种检出底限为豜。背景,不预杂交更为合适。结果显示:对于易养菌的感染,两种方法检测的灵敏度相近,吻合程度菌培养方法,二者具有显著性差异..。.
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细菌感染是新生儿重症监护病房虏⌒院椭滤佬缘闹匾R蛩亍。常见引起新生儿感染的细菌病原菌主要有金黄色葡萄球菌,大肠埃希氏菌,肺炎克雷伯氏菌,肺炎链球菌,乙型溶血性链球菌,铜绿假单胞菌,流感嗜血杆菌,脑膜炎奈瑟氏菌等‘”4诚妇锒鲜窃谂嘌头掷氩≡幕∩弦谰菅G逖Х法和形态与生化检测鉴定病原菌。这种方法最大的弊端是培养和鉴定细菌需要较长的时间,通常需要小时以上,无法及时为临床提供抗生素选择依据,而盲目应用不恰当的抗生素可造成病原菌抗性积累⋯。更有甚者,一些苛养菌难以培养或者不能被培养出来,根本无法提供病原菌信息。因此,早期、快速、简便、敏感地检测临床致病菌,是目前亟八十年代以来,随着分子生物学理论与技术的发展,核酸分子杂交、然蛘锒霞际跸嗉涛适溃⒅鸩接τ糜诹俅仓虏【目焖僬锒希且由单基因鸩较蚨嗷騊方向发展“““5セ騊技术操作相对比较简便,可以对细菌特异基因进行┰觯虻タ焖俚丶俅蚕妇“。但是临床分离的细菌多样性给锒洗戳丝佳椋匦氩捎枚嗵迪侄钥梢刹≡募ǎ馐沟谜锒瞎ぷ鞅涞梅浅7彼觯菀壮龃怼多重淙荒懿糠挚朔ザ砸颬缺点““”奔ǖ南妇掷数量非常有限,因为引物越多,越容易导致假阳性结果和其它错误“⋯。通过一对引物对细菌保守的基因进行扩增,分析锬苡行У实现对不同细菌的同时鉴定。应的蛄校嬖谟谒械南妇旧寤蜃橹小O妇序列包括所有原核生物均相同的保守序列、种属特异的半保守序列和种特异性序列,保守区序列和可变区序列交错排列“”。保守区序列为所有细菌所共有,通过设计保守区引物进行┰觯膳卸舷妇嬖谟敕瘢豢变区序列因不同细菌而异,针对可变区设计特异性引物,可检测多种特用于多