文档介绍：中山大学
硕士学位论文
肠杆菌科食源性感染常见致病菌寡核苷酸芯片检测的研究
姓名:胡玉山
申请学位级别:硕士
专业:医学微生物学
指导教师:江丽芳
20050525
肠杆菌科食源性感染常见致病菌寡核苷酸芯片检测的研究中文摘要硕士研究生:师:江丽芳教授中山大学基础医学院微生物教研室胡玉山导广州研究背景和目的:食源性疾病是由于食用或饮用了被致病因素污染的食物或饮料引起的疾病。常见的致病因素有致病微生物、天然毒素、寄生虫和有毒有害化学物质。虽然毒素、寄生虫和有毒有害化学物质是食源性疾病的重要原因,但是致病微生物引起的食源性感染才是食源性疾病发生的主要因素。肠道感染细菌是一类通过粪一口途径进行传播的微生物,即细菌经粪便排出体外污染环境,再通过各种媒介,如食物、水、手、器皿等经口进入机体。肠道感染细菌主要包括肠杆菌科细菌、幽门螺杆菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌及弯曲菌属等。,与医学有关的包括埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属、肠杆菌属和耶尔森菌属等常引起食源性感染疾病。食源性感染疾病长期以来危害着人类健康,近些年来因国际旅游和贸易的增加、环境和人类生活方式改变等原因,我国食源性感染疾病有所增加,引起食源性感染的致病菌也逐渐表现出多样化,但大部分仍由肠道致病菌引起。为了有效遏制这些感染性疾病的发生,对这些致病菌的快速鉴定成为迫切需要解决的问题。以往对细菌的分型常采用传统的生物学方法,如血清学分型、营养分型法等。但由于菌株本身及方法敏感性等因素的影响,往往对不同的菌株无法进行有效区分。分子生物学技术的发展为细菌的分型提供了强有力的工具,使细菌的分型提硕士学位论文:肠杆菌科食源性感染常见致病菌寡核苷酸芯片检测的研究
研究内容与方法:高到分子水平,也为流行病学上追查病原菌的传染源、传播途径等成为可能。从基因水平进行属种乃至亚种的鉴定不但可以快速鉴定病原菌的种属,还可以进一步追踪病原菌的亚种、血清型及遗传上的亲缘关系。多重怯靡恢忠陨系引物在同一反应管中同时扩增出多条目的蔚暮怂崂┰龇椒ā6嘀豍的出现使得一次笛榭赏奔觳舛嘀帜康暮怂岢晌?赡堋=⒃赑基础上的限制性片段长度多态性分析和单链构象多态性分析技术,就是首先通过扩增病原菌的特异性基因片段,然后再通过酶切分析、单链构像多态性分析进行属的鉴定、甚至属内种的鉴定。即使是同种细菌的不同亚种、血清型,由于其时间、地点来源的不同,在基因水平上也会出现一定的差异,这些差异为追踪菌株的来源和进化关系提供了依据。技术甚至可以检测出基因片段中单个碱基的改变。基因芯片技术是一种反向固相杂交技术,它将大量探针分子固定于支持物上,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。由于用该技术可以将大量的探针同时固定于支持物上,因而基因芯片技术具有高通量、并行处理、微型化和易于自动化等优点。目前,基因芯片技术在医学、分子生物学领域应用已经越来越广泛,它可实现大量序列的平行鉴定,迅速敏感地检测基因表达。基因芯片技术在致病微生物研究中已得到广泛应用。本研究旨在教研室己有的研究工作基础之上,探讨寡核苷酸芯片技术快速检测和鉴定肠杆菌科食源性感染常见致病菌的可行性,为肠杆菌科食源性感染致病菌的快速诊断奠定良好的基础。本教研室已经建立了对食源性感染细菌属的初步鉴定的方法,但还没有进行属水平以下的快速诊断研究,并且如果选择单基因片段作为研究对象将出现部分种属无法鉴定的问题。本研究在教研室已有的研究基础上进~步探讨选择多基因片段,在肠杆菌科食源性感染常见致病菌进行属以下分类水平的快速鉴定的可能性,以便建立快速、特异、敏感的诊断方法,为临床治疗和感染控制提供依据。本研究选择细菌的保守性序列和基因作为研究对象,通过硕七学位论文:肠杆菌科食源性感染常见致病菌寡核苷陵芯片检测的研究
结果:结论:关键词:肠杆菌科食源性感染致病菌;多重籖籗换蛐酒多重蚉.、方法探讨建立肠杆菌科不同属种、血清型细菌鉴别的可行性,进而建立鉴别诊断的寡核苷酸芯片技术。研究内容与方法具体如下:嘀豍扩增肠杆菌科致病菌基因。擞肦蚐际跽攵基因进行肠杆菌科致病菌的初步鉴擞基因的寡核苷酸芯片技术进行肠杆菌科致病菌的鉴定。擞枚嘀豍可以同时扩增出肠杆菌科致病菌基因和基因片段。攵基因片段的酶切产物的分析表明,不同种属的致病菌表现出相似的图谱。分析显示,种肠杆菌科常见致病菌图谱变异性很大,有利于进行细菌鉴定。诰坏脑咏惶跫直曜季牍押塑账嵝酒咏唬玫馗咝撩噶C庖法进行显色,,窒妇咏恍藕湃酰ɑ箍梢员姹稹吃葱愿腥玖俅脖瓯炯觳獾慕峁砻鳎狙芯拷⒌姆椒ㄍü徊降难芯坑望用于肠杆菌科食源性感染致病菌的快速诊断。本研究在多重蚐际趸≈辖⒌基因的寡核苷酸芯片技术可快速鉴定肠