文档介绍：硬脂酸镁的微生物限度检查一、概述本报告按 USP31 中“〈 61-62 〉非灭菌产品的微生物学检查”的规定,对硬脂酸美的微生物学检查方法学考察。参照企业提供标准,通过测试实验制定适合于本品的微生物学检查的方法。企业提供标准: 总需气菌数( TAMC )不得过 1000 cfu/g ;霉菌及酵母菌总数( TYMC )不得过 500 cfu/g ;每 1g样品不得检出大肠埃希菌;每 10g 样品不得检出沙门氏菌。二、方法学 1、培养基及试剂实验用培养基及缓冲液均符合 USP 规定。 BP : ***化钠蛋白胨缓冲液 CA :溴化十六烷基三甲铵 MCA :麦康凯琼脂 MCB :麦康凯肉汤 MSA :甘露醇盐琼脂 RVS : RV 沙门菌增菌肉汤 SDA :沙氏葡萄糖琼脂 SDB :沙氏葡萄糖肉汤 TSA :大豆胰酪胨琼脂 TSB :大豆胰酪胨肉汤 XLD :赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂 2、实验菌株黑曲霉 16404 枯草芽孢杆菌 6633 , (B)63501 白色念珠菌 10231 , (F)98001 大肠埃希菌 8739 铜绿假单胞菌 9027 霍乱沙门氏菌 14028 金黄色葡萄球菌 6538 , (B)26003 本实验取用中国临床医学菌种保存中心( )的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和金黄色葡萄球菌。这三株菌也来源于。实验用菌株,自种子批启用传代不超过 5次。黑曲霉为 3个月内制得的 4℃保存的孢子悬液,可直接稀释使用。参照表格 2 ,将其他 6 株菌分别接种至规定的培养条件培养。上述各菌分别以 ***化钠蛋白胨缓冲液 10倍稀释至大约 50-100 cfu/mL 的浓度,备用。参照表格 2各菌株的生长条件,采用浇碟法测定稀释得到的最终菌液浓度。 3、方法学本部分主要包括培养基特性测试和方法的适用性考察。培养基特性测试按照 USP31 中“〈 61-62 〉非灭菌产品的微生物学检查”的规定,与已经通过测试验证的参比培养基(MⅠ)相比, 当微生物限度检查用培养基(MⅡ)符合以下标准,则用于硬脂酸美的微生物学检验: :与MⅠ相比,MⅡ的回收率应在 50%-200% 之间。 :与MⅠ相比,规定菌株在 MⅡ的生长特征应与之类似。 :与 MⅠ相比,规定菌株在 MⅡ有明显浑浊。 :无论是固体培养基或是液体培养基,规定菌株在其不得生长。对于固体培养基,通常采用平皿计数法(包括浇碟法和表面接种法)来评价培养基特性,每次平行测试两皿,最后取平均数为计算结果。培养基特性测试结果见表格 3-表格 5。方法适用性当微生物学检查方法符合以下要求时,说明该方法适用该品种: 。计数实验中,测试微生物在供试样品中的回收率不得低于接种量的 50% ;控制菌检查中,测试菌在含有规定量供试品的环境中应可以生长。。供试液制备: 以70% 的乙醇擦拭供试品的外包装,使自然挥干。由于硬脂酸美是一种脂溶性物质,因此用表面活性剂吐温-80 将其溶解。无菌操作取 10g 硬脂酸美置灭菌过的三角烧瓶,加入一定量的 45℃灭菌的含 1% 吐温-80 的 ***化钠蛋白胨缓冲液,振摇使分散均匀,