文档介绍：东北农业大学
博士学位论文
表观遗传修饰状态与猪体细胞核移植胚胎发育潜能研究
姓名:郇延军
申请学位级别:博士
专业:生物学;生物化学与分子生物学
指导教师:刘忠华
2012-06-20
摘要首例体细胞克隆猪已出生十多年,但核移植效率一直很低,困扰着克隆猪的应用。体细胞核移植通常采用分化的体细胞和成熟的卵母细胞,供体细胞和卵母细胞的质量直接决定着后期克隆胚胎发育。目前认为克隆效率低的主要原因是供体细胞核未被完全重编程,主要体现在基因组高甲基化水平。体细胞核移植后细胞核表观遗传修饰重建是影响到克隆胚胎能否发育到期的关键因素,因此通过调控克隆胚胎的表观遗传修饰可能会提高核移植效率。本研究拟通过对胞质成熟和供体细胞在猪克隆胚胎中发挥的作用进行研究,探索胞质成熟和供体细胞对核移植胚胎发育的影响,同时利用表观修饰药物和扰低谆R泼探讨和阐明表观遗传修饰状态以及关键基因的表达水平在克隆胚胎重编程过程中的作用,希望为提高猪体细胞核移植效率提供理论依据。主要研究结果如下:诼涯赶赴逋獬墒熘校教至税食墒於院艘浦才咛シ⒂⒂墓丶┨逑赴刺跋熳藕艘浦才咛シ⒂怨┨逑赴掷唷⑿员鸷图谆潭冉蟹析,结果表明:相对于卵丘细胞和成体成纤维细胞,胎儿成纤维细胞更适合于体细胞核移植;与雄性胎儿成纤维细胞相对,雌性胎儿成纤维细作为供体细胞时核移植胚胎发育能力差异不显著,而雌性胎儿成纤维细更适合于旧迨Щ畹幕硌芯浚甦够显著降低或提高胎儿成纤维细胞的甲基化水平.ú⒉焕诤艘浦残实奶岣摺这表明雌性胎儿成纤维细胞更适合作为体细胞核移植的供体细胞,而改变其甲基化水平不利于体细胞重编程。.对供体细胞和核移植胚胎进行处理,分析了处理后对细胞增殖、胚胎发育、核重塑及基因表达等的影响,结果表明:猟怨┨逑赴鲋尘哂幸种谱饔茫能够显著降低谆R泼和和提高矛诠┨逑赴械谋泶锼,处理供体细胞后不利于核移植胚胎的发育饕1硐治:酥厮苣芰Σ睢⑴咛ヂ蚜崖实鸵约谆R泼富蚝投嗄苄曰虮泶锼轿吹玫礁纳;,促进了类原核形成和早期卵裂,改善了基转移酶基因、印记基因、多能性基因以及去甲基化相关基因的表达水平,使其接近于体外受精胚胎表达模式;甦贝砉┨逑赴秃艘浦才咛ィ⒂┨搴说闹乇喑獭肨对核移植胚胎进行处理,观察了处理后体内外克隆胚胎的发育能力,同时对砥诩浠虮泶锏谋浠辛朔治觯峁砻鳎篢能够显著增加核移植胚胎的体外发育率;进行胚胎移植后,相对于正常核移植胚胎,处理组提高了克隆胚胎妊娠率和出生率,并能有效的防止大舌头病和死胎的发生;砗笙灾涌炝斯┨逑赴嘶虻重编程和改善了谆R泼富虻谋泶。这表明砟芄辉銮抗┨搴的重塑和纠正胚胎发育相关基因的表达,从而增强体内外胚胎发育能力。摘要
肦诺虳或许能够改善娜ゼ谆佣岣吆艘浦才咛サ姆⒂果表明,壁颗粒细胞共培养可以增强裸卵成熟质量,为干扰体系奠定了了基础;诺秃不影响卵母细胞的成熟;诺秃笙灾档土撕艘浦才咛サ姆⒂,多数胚胎阻滞在细胞。这表明诤艘浦才咛ピ缙诜⒂讨衅鹱胖匾W饔茫实钡谋泶水平才是决定胚胎发育的因素。关键词猪;胚胎;体细胞核移植;表观修饰能力,对体系、诺秃蟮穆涯赶赴墒旌秃艘浦才咛シ⒂芰辛朔治觯东北农业大学理学博士学位论文
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本研究由以下项目资助“国家自然科学基金”钅勘嗪牛“黑龙江省杰出青年基金项目编号:甁
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