文档介绍：西南大学
硕士学位论文
猪颗粒细胞核移植重组核的重塑和重组胚发育研究
姓名:张力
申请学位级别:硕士
专业:细胞生物学
指导教师:李跃民
20070501
猪颗粒细胞核移植重组核的重塑和重组胚发育研究摘要细胞生物学专业硕士研究生张力指导教师李跃民教授目前,核移植技术存在很严重的问题,即总效率低、流产率高、克隆动物异常发育等。这些问题可能归因于体细胞的分化程度、处理方法和核移植后重组胚胎的核重新编程不完整等。核的重编程过程大体可分为重组胚核形态的重塑和核基因组的后生遗传修饰。核的重塑是在成熟促进因子淖饔孟峦瓿傻模庖还掏瓿傻闹柿恐苯庸叵档胶说闹乇喑痰正确性、重组胚胎的质量和克隆动物的健康。核的重编程是~个多基因修饰的过程,目前没有明确的生化指标来衡量基因组重编程的程度,,以去核的蚵涯赶赴J芴褰泻艘浦玻ü延长移入核与卵母细胞胞质的互作时间映偌せ钍奔、在胚胎液中添加咖啡因以及传代培养颗粒细胞和不同的同步化处理方式来研究重组胚核的重塑效果和重组胚胎的发育效果,⒂Ч挠跋臁=刈榕吲嘌贜中,分别培养、.后,以强度为七,宽度为次电脉冲激活,培养后观察胚胎的卵裂率、细胞比率和赴陨吓咛ケ壤荚谘芯垦映偌せ钍间延长院说淖饔枚耘咛シ⒂挠跋臁=峁允荆刈榕叩穆蚜崖省细胞比率和细胞以上胚胎比例,‘,而和啾龋咧洳钜觳幌灾,,延迟激活时间使胫刈楹俗饔檬奔湓黾佣耘咛サ姆⒂⒂挠跋臁1臼匝榘ㄒ韵氯鄄旌艘浦埠驪形成的过程。核移植胚胎培养于含有或者不含有甋咖啡因的胚胎培养液·中,培养、.后,在室温下用的甲醇乙酸固定儆胠%醋酸地农红染色,镜检,,不管在胚胎液中添加或不添加Х纫颍刈榕吆硕际紫扰虼蟆⑷缓蠛四て屏⒆詈笕旧宓哪,Х纫蚨灾刈榕吆酥厮艿挠跋臁:.、和螅玫匾潞烊旧ü鄄霳蚉西南大学硕士毕业论文方面:即核的重塑过程相同.
核移植重组胚的发育的影响。结果显示,卵裂率分别为.%鲋肋生,.发生率在%左右。而含咖啡因组从一琋⑸;不含咖啡因组姆⑸覱迅速升高到.%,埃明显降低,而含咖啡因组姆⑸从杆偕叩浇ィ档停⑶⑸氏灾哂诓缓Х纫蜃。表明,核移植后是重组胚核重塑完成葱纬蒔母叻澹砑涌Х纫蜃橄灾哂诿挥刑砑涌Х因组,说明咖啡因加速了重塑的完成,对重组胚核重塑的完成有明显的Х纫蚨灾刈榕叻⒂挠跋臁=,.%,问差异显著.=峁砻鳎Х纫蛩淙欢灾刈榕叽俾蚜炎饔貌幻飨裕嵌耘咛サ脑试验嚎帕O赴拇ù嘌院艘浦才咛シ⒂挠跋欤臼匝榉治H椋篒组为原代培养;组为传代培养危虎笞槲4ù嘌次。核移植后融合,在显微操作仪下观察“颗粒细胞一卵母细胞”复合体的融合情况,比较“”复合体的融合率;培养后观察统计重组胚胎的卵裂率、赴屎细胞以上胚胎率,旨在研究传代培养对“颗粒细胞涯赶赴备春咸宓娜诤夏芰团咛シ⒂芰Φ挠跋臁=峁允荆诤下史直鹗%,,.%橹洳钜觳幌灾鴉;卵裂率分别为.%、.、.%,.⒂赴陨吓咛サ谋壤齀、Ⅱ和Ⅲ组分别为.%、.%/,ù嘌浴翱粒细胞一卵母细胞”复合体的融合能力没有影响。试验嚎帕O赴鸊疓诓煌交矸绞蕉院艘浦才咛シ⒂Ч挠跋欤貌分汇合ぢ蓿、高度汇合天脱G寮⒍的颗粒细胞作为核供体,融合激活后在显微操作仪下观察“颗粒细胞一卵母细胞”复合体的融合情况,比较“”复合体的融合率,并且在培养后观察胚胎的发育效果,以组胚胎的卵裂率、细胞率和细胞以上胚胎率为衡量指标,旨在研究不同同步化处理方式对“”复合体的融合能力、,融合率分别为.%.%.%橹洳钜觳幌灾纾;卵裂率分别为.%西南大学硕十毕业论文摘要的发生,旨在研究咖啡因对核重塑的影响。结果显示,..赴陨吓咛ケ壤直鹗和%/A阶期发育有促进作用。,三组之间差异、.%和.%,三者之间差异不显著..赴
关键词:猪;核移植;卵泡颗粒细胞;血清饥饿;%、.%和.%,、.%和.%/“复合体的融合能力和