文档介绍：广西大学
硕士学位论文
猪体细胞核移植电融合参数的研究
姓名:李日聪
申请学位级别:硕士
专业:动物遗传育种与繁殖
指导教师:石德顺
20060601
猪体细胞核移植电融合参数的研究摘要为确定猪体细胞核移植中适宜的电融合参数,本研究用体外成熟小时的猪卵母细胞为核移植受体,猪颗粒细胞为核移植供体,共进行了四个实验。实验一探讨了电脉冲强度对电融合效果的影响,结果发现,/组的融合率%飨愿哂./组%,但其分裂率%吧i┡撸遗叻⒂.与/组%,.差异不明显.∞鱿灾哂./组%,..%蜕i┡撸遗发育率%%挥邢灾钜,但其分裂率明显高于脉冲时间为¨.。实验三探讨了脉冲次数对电融合效果的影响,结果发现,,结果发现,%.,分裂率%.以及胚胎发育率%.:在本实验室条件下,猪体细胞核移植中的适宜电融合参数为:/,邮,电脉冲巍关键词:猪体细胞核移植;电融合;电脉冲强度;电脉冲时间;电脉冲次数;交流电
;./%,..,..%.%...,%...,..;//痗.,.;籶甌甈耻瓵;
哺乳动物体细胞核移植技术的研究进展接获得与亲本具有相同遗传性状后代的过程,包括孤雌生殖、卵裂球分离与培养、胚胎动物克隆是现代胚胎工程技术的重要组成部分,无论对于农业还是医学都有着很重要的意义。“克隆”源自希腊语中的“馑际侵覆逯喑莆N扌苑敝T诙锓敝逞е校锟寺〉亩ㄒ迨侵付锊痪行陨车姆绞蕉分割以及细胞核移植等。而产生克隆动物的方法则称之为动物克隆技术滤常。在高等哺乳动物,由于细胞核移植是生产克隆动物最为有效的克隆技术,所以动物克隆技术实际上是指细胞核移植技术。细胞核移植或是指利用一定的设备和技术手段,将供体细胞的细胞核放入预先去核的成熟卵母细胞或早期合子内,形成一个新的核质重组体,移入的核在受体胞质的作用下,发生发育程序重编沟煤质重组体与正常受精卵一样,经细胞分裂、分化并在母体内发育成一个新的个体钛峰,8莨┨逑赴闹掷啵山赴艘浦卜治E咛ハ赴艘浦玻咛ジ上赴核移植,体细胞核移植等等。自从等在年利用体细胞成功克隆出绵羊“多莉”以来,体细胞核移植技术得到很大的发展,先后诞生了体细胞克隆小鼠,⑴⑸窖,⒅,⑼,兔.⒙,⒋笫马,退石德顺、贺根生报道,科学时报,;陆风花,等。本文将对哺乳动物体细胞核移植的相关内容作个综述。溉槎锵赴艘浦驳幕细胞核移植的实质是一种核质杂交。来源于同一胚胎的卵裂球以及由这个胚胎分化出来的各种组织细胞都具有相同的染色体基因组,所以来自同一胚胎或个体的重组胚产生的后代,都具有相同的遗传基础;作为核受体的成熟卵母细胞含有一些特殊的因子,能使移入的细胞核去分化,恢复全能性,回到发育的初始状态,重新启动重构胚胎的发育程序,亦称再程序化在卵母细胞激活过程中的作用在自然条件下,成熟的卵母细胞是通过受精来恢复有丝分裂,激活以后的发育过程,通常是认为精子是通过产生胞内游离的瞬时升高来诱导卵子的活化。尽管卵子的活化过程可能包括许多化学和物理因素,但最初激活卵子的信号可能是瞬时升高的,,广西大学硕士论文:猪体细胞核移植电融合参数的研究,,;
供体核所处的细胞周期密切相关的核膜崩解因为人为提高胞内的浓度可以实现激活卵子Q芯恐な担母细胞停滞在谑怯捎诔中咚降某墒分裂俳蜃突蛳赴仓挂蜃隆的活性是由次郑鳦对非常敏感的。诘穆涯赶赴煌5暮铣蒀,使恢贝τ诟咚健5盡期卵母细胞受精时,立即激发卵内平的脉冲升高,解除了囊种谱饔茫佣贾翸活性下降,卵子完成第二次减数分裂,排出第二极体,进入有丝分裂间期。因此,在卵母细胞的激活过程中起到十分重要的作用。供体细胞与受体卵母细胞的相互作用作为核受体可以是去核的诼涯赶赴叭ズ说氖芫眩矶嗍笛橹っ饔肕期卵母细胞作受体所得的重构胚发育率比其它类型的核受体高故一般选择诼涯赶赴魑:耸芴濉H缜八觯琈期卵母细胞是含有高水平的耸比绻迫牍┨搴耍盏计浞⑸幌盗械男翁浠即核修饰ㄒ迫牒琋,染色体超前浓缩,,核仁分散、核膜重新出现和类原核的形成琍以及原核膨大等,H绻诼涯赶赴激活一段时间后再移入供体核,则不会发生等核修饰变化。由此可见诼母细胞质中高活性鞘挂迫牒朔⑸鶱蚉的原因。的结果,使移入核的染色体暴露给诼阎。供体核在诼涯赶赴手械谋浠:诠┨搴耍旧驶岱⑸典型的粉末化,核内染色体极易出现异常;科诤嗽贛的作用下染色质浓缩形成单个或双染色单体,不会出现染色体损伤,供体核芙姓5母粗疲从而保持正常的二倍体核型:若将处于期的供体核移入诼涯赶赴校蚧嵋脑俅胃