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路彳学位论文作者:莎釜彳晁暝滦瓮日期:弘晁暝瞒匀原创性声明学位论文使用授权声明秉承郑州大学严谨的学风与优良的科学道德,本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用和致谢的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确的方式标明。申请学位论文与资料若有不实之处,本人愿承担一切相关法律责任。本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者:日期:矽
人子宫内膜干细胞体外分离、培养及鉴定要摘硕士研究生:路平师:郭玉琪专业:妇产科学郑州大学第三临床学院郑州不孕症是妇科常见病之一,其中,女性因素占.%,在引起女性不孕的众多原因中%为宫腔粘连导致。宫腔粘连的发生主要与宫腔手术创伤和宫腔感染有关,是宫腔手术后的远期主要并发症。患者大多有过多次人工流产史,尤其是人工流产术中过度刮宫,或术后继发宫腔感染,破坏了子宫内膜,重时即可形成宫腔粘连,导致闭经和继发不孕。宫腔镜手术分离配合雌孕激素人工周期治疗是目前主要的治疗方案。但治疗效果并不太满意,子宫内膜的发育并不能很好的改善。子宫内膜是一个高度再生组织,在整个妇女的生育期要经历生长、分化和脱落啻蔚难贰Q芯肯允咀庸谀ぶ泻凶庸谀じ上赴2⒔涠ㄎ于子宫内膜和子宫肌层交界部位。子宫内膜干细胞作为一种成体干细胞,已被证实具有高增殖潜力和多向分化的功能。子宫内膜干细胞在子宫内膜周期性增生和脱落中起到了关键作用。鉴于子宫内膜干细胞与子宫内膜生长的密切关系。我们从体外分离培养子宫内膜干细胞,然后移植到子宫内膜治疗子宫内膜发育不良性疾病,可能为因子宫内膜原因而导致的不孕症提供一种新的治疗方法。本实验主要探讨从切除的子宫中分离、培养子宫内膜干细胞,并对常用的三种细胞分离方法进行比较,旨在找出一种简便、实用、高效的体外分离、培养子宫内膜干细胞的方法,为进一步的研究提供基础的参考数据。摘要导河南严
目的材料与方法牧椒标本的处理组织分离和培养细胞的鉴定方法剿鞔忧谐淖庸蟹掷肱嘌庸谀じ上赴ü匀植煌掷敕椒ǖ谋冉希又杏叛〕鲆恢旨虮恪⑹涤谩⒏咝У体外分离、培养人子宫内膜干细胞的方法。选取年年略谥V荽笱У谌绞粢皆焊究埔蜃庸×觥子宫脱垂、原位宫颈癌等而进行子宫切除手术的住院治疗的患者,年龄在~岁。要求术前鲈挛词褂霉魏渭に亍O晗讣锹疾∪说男畔ⅲ缒炅洌术切除子宫的原因等。子宫全切术后,无菌剃取子宫内膜组织并包括的子宫肌层。将收集的子宫内膜标本放入无菌的青、链霉素溶液中,谒腿胧笛槭摇S梦轈的缓冲液谐逑矗钡揭禾迩辶痢R迫胛蘧呐嘌笾校醚劭萍剪至笮。屎础采用三种不同的分离方法:胰蛋白酶法、胶原酶ê突旌戏胰蛋白酶法涸窱法邢赴掷牒吞崛。⒍匀植煌姆掷敕椒ń斜冉稀将分离的细胞悬液用台盼兰染色,计数活细胞。按照个/的细胞密度分别接种于呐嘌恐校珼疐培养液中包含%胎牛血清,青、链霉素溶液,。%嘌浞跤蠡灰阂淮巍Fノ刺谙胞,以后每旎灰阂淮危⒐鄄煜赴で榭觥每种方法实验重复次,取第さ降天的细胞,用台盼兰染色,倒置显微镜下计数活细胞数,每高倍镜下计数三次,取其平均数。以比较那种分离方法得到的活细胞数量多。摘要
当日示绘制细胞生长曲线图对三组间年龄比较,】固澹捎免疫细胞化学法和法,对培养的子宫内膜干细胞进行鉴定。取对数生长期的细胞,接种于孔板中,置培养箱培养:每剖次,每次计三孔,取其平均数;连续计数欤米柿弦蕴焓:嶙辏细胞数为纵坐标绘制曲线,绘制细胞生长曲线。±标准差±表示,—头讲钇胄约煅’。多士甲庸谀じ上赴翁鄄培养的子宫内膜干细胞形态呈梭形,具有成纤维细胞形态,细胞贴壁平铺生长,细胞排列无极性。庸谀じ上赴募经干细胞标志物和タ姑庖呦赴旧Q粜裕痪璕鉴定子宫内膜干细胞和腄分别在高表达,而对照组不表达。证明培养的细胞具有干细胞特性。址掷敕椒ㄅ嘌淖庸谀じ上赴ぶ芷诘谋冉所得单细胞悬液经培养后,.>=啤癝”形,具有相同的细胞生长周期。三种分离方法的比较三种分离方法获得的活细胞比较,