文档介绍：土壤生物化学指标测定土壤脱氢酶(dehydrogenase)活性测定(比色法)(一) 分析意义脱氢酶能酶促脱氢反应,它起着氢的屮间传递体的作用。在土壤中,碳水化合物和有机酸的脱氛酶作用比较活跃,他们可以作为氮的工体。脱氮酶能自基质中析出氢而进行氧化作用。(二) 方法选择与原理Lenhard(1956)最先提出用TTC作为蛍的受体生成红色的TF,进行闭塞测定,以溶液的光密度值表示解活性。后来对上述的方法做了不同的改进和完善。用土壤有机质作为氢的供体或用葡萄糖做氢的供体,用生成的TF数量或换算成氢的体积来表示脱氢酶的活性。(三) 试剂配制1、 %TTC溶液2、甲苯3、 Tris-:***氨基甲烷(),用水稀样至lOOmL4、硫化钠5、 0・lnwl/L葡萄糖溶液。(四) 实验步骤1、标准曲线的绘制:称取相当于50mg纯品量的己烘干的TTC于50ml比色管中,定容,制成1mg/L的母液。、、、、、,用蒸馅水定容至5mL。在试管中依次加入2mLTris-HCl缓冲液,2mL蒸憎水,2mLTTC系列溶液,对照组不加TTC,再各加入lg低亚硫酸钠,摇匀,待溶液充分显色后,各管准确加入5ml甲苯,振荡萃取2min,取上层有机溶液在紫外分光光度计492nm处闭塞绘制标准曲线。2、操作过程:取lg新鲜十•壤,置于5()ml比色管屮,依次加入4mlTris-HCl盐酸缓冲液、、%TTC溶液,震荡均匀,离心(4000转/分)5分钟后,将甲苯提取液在分光光度计492nm处闭塞测定。同时设无土壤和无TTC的对照(以蒸馆水替代)。3、结果计算:脱氢酶活性-TF含量/-土壤含水量脱氢酶活性,以24h示lg干土屮TF的生成量表示。过氧化氢酶(Catalaseactivity)活性测定(滴定法)试剂配制(1) %过氧化氢溶液lOOmL:取lmL30%的过氧化氢溶液,在100mL容量瓶屮定溶至1OOmL即可。(2) 3N硫酸。(3) :,稀释至500mL,。操作步骤取2g土壤样站,置于lOOmL三角瓶中,%过氧化氛溶液。将三介瓶放在摇床上,振荡20mino而后加入5mL3N硫酸,以稳定未分解的过氧化氢。再将瓶中悬液用慢速滤纸过滤。然后,吸取25mL滤液,,所消耗的高镒酸钾量(mL数)记为B;另取一管不加土样作对照,按上述方法操作,即滴定25mL原始的过氧化氢混合液,所消耗的高镒酸钾量(mL数)记为A。结果计算以20min后lg土壤的0」N高猛酸钾滴定的毫升数表示过氧化氢酶活性。即A-B为过氧化氢酶活性。单位:mgKMnO4•g1•minL土壤腺酶(urease)活性的测定(比色法)(一) 分析意义腺解广泛存在于土壤中,是研究的比较深入的一种土壤輛。服稿酶促产物氨是植物氮源Z—。尿素氮肥水解于腺酶密切相关。有机肥料中也有游离尿美的存在。同时服酶与土壤其他因了(有机