文档介绍：土壤生物化学指标测定
土壤脱氢酶(dehydrogenase)活性测定(比色法)
分析意义脱氢酶能酶促脱氢反映,它起着氢的中间传递题的作用。在土壤中,碳水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃,他们可以作为氢的工体。脱氢酶能自基质中析出氢而进行氧化作用。
方法选择与原理 Lenhard(1956)最先提出用TTC作为氢的受体生成红色的TF,进行闭塞测定,以溶液的光密度值表示酶活性。
后来对上述的方法做了不同的改进和完善。用土壤有机质作为氢的供体或用葡萄糖做氢的供体,用生成的TF数量或换算成氢的体积来表示脱氢酶的活性。
试剂配制
1、%TTC溶液
2、甲苯
3、Tris-:***氨基甲烷()50ml ,用水稀释至100ml。
4、硫化钠
5、。
(四)实验步骤
1、标准曲线的绘制:称取相当于50mg纯品量的已烘干的TTC于50 ml比色管中,定容,制成1 mg/L的母液。分别向6支50ml比色管中依次注入1、2、3、4、5、6mL mg/ml标准 TTC溶液,用蒸馏水定容,是为工作液:取7只带塞比色管(50ml)依次加入2 mL Tris-HCl演算缓冲液,1 mL不同浓度的TTC工作液,1 mL10%硫化钠新配溶液,摇匀,放置20分钟;反应完全后,准确加入10ml甲苯,振摇。完全提取TF,稳定数分钟,取上层有机溶液在紫外分光光度计492nm处闭塞(在比色皿中也需稳定2分钟)绘制标准曲线。
2、操作过程:,置于50ml 比色管中,依次加入2mlTris-HCl盐酸缓冲液、1ml 、1ml % TTC溶液,震荡均匀,离心(4000转/分)5分钟后,将甲苯提取液在分光光度计492 nm处闭塞测定。同时设无土壤和无TTC的对照(以蒸馏水替代)。
3、结果计算:脱氢酶活性=TF含量/ —土壤含水量
脱氢酶活性,以24h后1g干土中 TF的生成量表示。
土壤过氧化氢酶(catalase)活性的测定(滴定法)
分析意义过氧化氢酶广泛存在于土壤汇总和生物体内。土壤过氧化氢酶促过氧化氢的分解有利于防止它对生物体的毒害作用。过氧化氢酶活性与土壤有机质含量有关,与微生物的数量也有关。一般认为,土壤中催化过氧化氢分解的活性,有30%或40%以上是耐热的,即非生物活性,常由锰、铁引起催化作用。土壤肥力因子与不耐热的即过氧化氢酶活性成正比。
方法选择与原理本法是基于用高锰酸钾滴定酶促反应前后,过氧化氢的量,由二者之间的差求出分解H2O2的量,以此来表示酶的活性。
2KMnO4+5 H2O2+3H2SO4------2MnSO4+K2SO4+8H2O+5O2
试剂配制
1、% H2O2
2、3N硫酸
3、(优级纯)溶液。
(四)实验步骤
1、操作过程:取2g 新鲜土壤,置于小口100 ml小口三角瓶中,并注入40ml 蒸馏水和5ml % H2O2,塞上塞子,将三角瓶放在恒温振荡机上(25 0C),震荡20 分钟。而后迅速加入5ml 3N硫酸,以稳定未分解的过氧化氢。再将瓶中的悬液用慢速型滤纸过滤。然后,吸取25ml滤液,