文档介绍：山东大学
硕士学位论文
重组南瓜胰蛋白酶抑制剂Ⅰ的分离纯化及活性研究
姓名:张文琦
申请学位级别:硕士
专业:微生物与生化药学
指导教师:王凤山
20081030
重组南瓜胰蛋白酶抑制剂姆掷氪炕盎钚匝芯摘要研究生张文琦导师王凤山教授来源于南瓜籽的经典类丝氨酸蛋白酶抑制剂,该家族由多种成员组成。的成员分子量小、结构简单、作用机制清楚,是研究活性蛋白质分子结构与功能关系及作用机制的良好工具。由于家族各成员在分子量和结构方面相近,目前很难从南瓜籽中分离纯化出大量单一,从而限制了其药用开发研究。为此,。为了对甀进行深入的研究与开发,本论文研究制备了以微晶纤维素为固定化介质的甀亲和纯化介质,建立了甀的分离纯化工艺,研究了甀对肿瘤细胞增殖的影响,并研究了甀对明胶酶的作用。研究内容与结果主要有以下几个方面。,并以胰蛋白酶为配基交联于其上获得了亲和层析介质,同时考察了微晶纤维素的最佳活化条件以及制备微晶纤维素亲和层析介质最佳胰蛋白酶用量。最佳活化条件为簂的溶液与寤作为混合溶剂,活化温度为,。,获得了基本纯化的甀。。脱盐,再用疞山东文学硕士学位论文
子交换剂和阴离子交换剂作为纯化介质相比,亲和层析介质纯化效果较好。,⑶艺庵忠种瞥拭飨的剂量一效应关系,在浓度为。%。本结果预示着甀有抗肿瘤作用。采用琥珀酰明胶法测定甀对明胶酶的作用,显示甀具有抑制明胶酶的活性,揭示甀可能具有抑制明胶酶降解基底膜抑制肿瘤转本研究取得的主要研究成果有:芯恐票噶伺剂S幸鹊鞍酌傅闹阄鲇梦⒕宋厍缀筒阄鼋橹剩并在此基础上研究建立了从工程菌发酵表达的上清液中分离纯化甀的工艺,该工艺适合规模化生产。芯糠⑾。捎苗牾C鹘悍ú舛╮.,揭示甀可能具有抑制明胶酶降解基底膜抑制肿瘤转移的作用。本研究对小分子活性肽的表达、分离纯化具有指导意义,为甀的药用开发奠定了基础。关键词南瓜胰蛋白酶抑制剂槐铣嘟湍福环掷耄淮炕豢怪琢鲎饔移的作用。山东文学硕士学位论文
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论文作者签名:盈塑导师签名:日期:翮、.,丛塞煎塑帷原创性声明关于学位论文使用授权的声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:期:本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑日
第一章前言易褰樯慕峁挂约暗鞍酌敢灰种萍粮春衔锏难芯甏幽瞎函保妇阎蟹丝氨酸蛋白酶抑制剂泛指具有抑制丝氨酸蛋白酶活性作用的一类物质,在动物、植物和微生物中广泛存在,能与体内参与各种调控作用的丝氨酸蛋白酶形成一定的动态平衡,调节生物体内许多重要的生命过程【¨。南瓜胰蛋白酶抑制剂易迨粲诰淅嗨堪彼岬鞍酌敢种萍粒它们的分子量小、结构简单、作用机制清楚,是研究活性蛋白质分子结构与功能南瓜属于葫芦科参铮雍ǹ浦参镒阎蟹掷氲乃堪彼岬鞍酶抑制剂是植物蛋白酶抑制剂家族中的一类,这类抑制剂有多个成员。除来自向日葵籽中的一个环状含有个氨基酸残基的向日葵胰蛋白酶抑制剂..】之外,南瓜胰蛋白酶抑雔易迨且阎W钚〉奶烊凰堪彼岬鞍酌敢种萍粒呛.