文档介绍：实验1微生物的分离、培养及计数实验原理纯化分离:人为提供适宜的菌落生长的条件(包括营养、温度、Ph等)。用平板划线法,通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞菌落。筛选:转基因大肠杆菌有抗氨苄青霉素基因,所以在含有氨苄青霉素的LB培养基中可以正常繁殖长成菌落。而普通的大肠杆菌没有抗氨苄青霉素基因,咋含有氨苄青霉素的LB培养基中不能繁殖。由此可进行大肠杆菌的筛选。梯度稀释并计数:通过浓度梯度稀释把液体培养基培养的大肠杆菌稀释到一定浓度,用稀释涂布平板法,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落。由此可计数计算大肠杆菌的数量。实验目的通过制备LB固体培养基,对平板进行划线等,学会使用固体LB平板。通过用液体培养基,学会对微生物进行扩大培养。通过稀释,学会用计数器对微生物进行计数。实验材料和药品待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、LB固体培养基、LB液体培养基、接种环、玻璃涂布器、培养皿、恒温培养箱、摇床、酒精灯、无菌水、移液枪、EP管实验步骤(用简单的流程图表示)筛选出普通大肠杆菌后,转接入液体LB培养基平板划线(第一次含AMP,第二次不含AMP)制备LB固体培养基(计算、称量、溶化、灭菌、倒平板)稀释涂布平板法(分别涂10-4、10-5)浓度梯度稀释:(10-4、10-5)扩大培养37℃摇床震动培养计数,观察实验现象,记录实验数据。实验数据的记录与分析(如照片、表格等)××107实验结果与讨论结果:×107ml/cm^×107ml/cm^×107ml/cm^3讨论:在稀释倍数为104的试验中大肠杆菌菌落较少,原因可能是在稀释过程操作中,震荡不够,而且由于不小心洒了半管104稀释液,所以取液接种的时候底层的大肠杆菌数量偏少了。也有可能是靠近酒精灯附近使得温度升高杀死了一部分细菌或者降低了活性。从实验图片中可以看出,涂布过程中由于操作失误导致固体培养基上不平滑,有多处破损,细菌在破损处的生长大多是不规则的连续紧挨在一起的,所以不便于菌落的计数,也会影响最终实验数据。课后提问使用稀释涂布平板计数法,计算出来的细菌数量与实际相比是偏大还是偏小呢?误差有多大?有没有误差更小的更准确的方法来计数?微生物的分离、培养和计数实验评价标准个人参与参考标准分值维度1:解题参与报告中有充足证据体现了该学生在实验的执行、交流等环节的高度参与。15报告中有一些证据体现了该学生在实验的执行、交流等环节的参与。10报告中没有证据体现该学生在实验的执行、交流等环节的参与。0项目执行参考标准分值维度1:完成度项目得到充分执行(可根据实际情况做出合理调整);15项目计划基本执行完毕;10项目计划未得到有效开展;0维度2:真实性留存全部可靠的原始数据记录及工作记录;15原始数据记录或工作记录稍有遗漏;10无原始数据、工作记录,或严重遗漏。