文档介绍：大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
实验 1 微生物的分离、培养及计数
实验原理
纯化分离：人为提供适宜的菌落生长的条件（包括营养、温度、 Ph 等）。用平板划
线法，通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞菌落。
筛选：转基因大肠杆菌有抗氨苄青霉素基因，所以在含有氨苄青霉素的 LB 培养基
中可以正常繁殖长成菌落。而普通的大肠杆菌没有抗氨苄青霉素基因，咋含有氨苄青霉素的 LB培养基中不能繁殖。由此可进行大肠杆菌的筛选。
梯度稀释并计数：通过浓度梯度稀释把液体培养基培养的大肠杆菌稀释到一定浓度，用
稀释涂布平板法，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。由此可计数计算大肠杆菌的数量。
实验目的
通过制备 LB 固体培养基，对平板进行划线等，学会使用固体 LB 平板。
通过用液体培养基，学会对微生物进行扩大培养。
通过稀释，学会用计数器对微生物进行计数。
实验材料和药品
待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、 LB 固体培养基、 LB液体培养基、接种环、
玻璃涂布器、培养皿、恒温培养箱、摇床、酒精灯、无菌水、移液枪、 EP管
实验步骤（用简单的流程图表示）
制备 LB 固体培养基
（计算、称量、溶化、
灭菌、倒平板）

平板划线
（第一次含 AMP,
第二次不含 AMP）

筛选出普通大肠杆
菌后，转接入液体
LB 培养基
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
稀释涂布平板法
浓度梯度稀释：
扩大培养
（分别涂 10-4、 10-5 ）
（ 10-4、 10-5）
37℃摇床震动培养
计数，观察实验现象，
记录实验数据。
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
大肠杆菌微生物培养实验报告及评价标准
实验数据的记录与分析（如照片、表格等）
稀释倍数
104
105
大肠杆菌单个菌落个数
83
77
99
11
18
12
平均数
浓度
×107
× 107
实验结果与讨论
结果：稀释了 105 计算出来的结果约为× 107ml/cm^3 稀释了 104 计算出来的结果约为× 1