文档介绍：胞向视网膜色素上皮细胞定向分化的研究鹗垦宦畚小鼠视网膜多潜能干细胞的分离培养和小鼠胚胎干细】作者姓名:肖庆学科专业:眼科学学院怠⑺:湘雅二医院指导教师:唐罗生教授副指导老师:高玲副教授答辩委员会主中南大学分类号二狾年五月密级·瘛■●·■
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.作者妣垂导日期:三生年日原创性声明学位论文版权使用授权书,,§《怎礓辏,,;本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名:本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。
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本研究受国家自然科学基金资助。
摘要研究背景视网膜色素上皮,具有复杂的结构和特殊的生理机能。芡淌赏崖涞墓飧惺芷飨赴饨谀づ,,这对光感受器细胞外节的更新及维持正常视觉功能至关重要,其功能障碍会导致严重视网膜疾病和一些严重的遗传性变性眼病,如病、先天性黑噱和年龄相关性黄斑变性.,等叫。因此应用赴浦仓瘟颇承┭鄣准膊∈瞧渲械囊桓鲅芯咳鹊悖壳懊临的主要问题是如何获得合适的浦蚕赴拍茉谝浦埠笥胨主残留的视网膜细胞达到最佳的整合效果,以求最大限度地重建患者的视功能。组织细胞工程尤其是干细胞工程的兴起为视网膜损伤的治疗提供了一种新的途径。极小胚胎样干细胞,敲拦芬姿刮笱研究小组从小鼠骨髓和人脐带血中分离出、具有类似胚胎干细胞生物特性的的多能干细胞口琇“却有∈笫油ど窬掀ぶ蟹掷肓讼嗨频氖油多潜能干细胞。已有研究证实:这些多潜能干细胞不仅具有与胚胎干细胞相似的形态学特征和细胞标记物,而且具有胚胎干细胞多分化潜能的特性,在体外可以被诱导分化为内胚层、中胚层、外胚层细胞,潜在分化能瑀博士学位论文
力强,若作为组织工程和临床治疗的种子细胞,可避免伦理争议,具有良好的应用前景。通过免疫磁珠分选的方法,我们从新生小鼠小鼠的神经视网膜组织中得到—一的同一细胞亚群,通过细胞免疫荧光和流式细胞仪检测其特性,为视网膜移植的供体选择提供新的来源。当然,目前最广泛的种子细胞来源还是胚胎干细胞,胚胎干细胞,哂形尴蘩┰龊投嘞蚍只能的特点,因此关于其诱导分化的研究成为干细胞研究的热点。如能在体外将胚胎干细胞源源不断地诱导分化成患者所需要的靶细胞鏡、光感受器细胞细胞赏黄剖油ひ浦仓忻媪俚供体来源有限的难题,具有广阔的应用前景。目前,将体外诱导分化成赴难芯恳丫〉昧艘欢ǖ某晒杓し艉谏细胞诱导时采用的赴愫屠嗨频挠盏继跫捎肞间充质细胞系作为饲养细胞层,小鼠细胞能分化为呈六角形排列的、胞浆中出现色素颗粒的赴溆盏夹实兔。除了共培养或组织移植,目前尚无较好获得有效母咝史椒āR虼耍颐巧柘建立一种无饲细胞层体外培养的小鼠诱导成光感受器和呐养体系,提高向盏夹省教置庖叽胖榉盅》椒ù有律鶦小鼠视网膜神经上皮中分离出具有多潜能干细胞特性的—一细胞群的可行性。目的中文摘要博士学位论文
芯啃∈笫油ざ嗲蹦芨上赴胄∈笈咛ジ上赴男翁卣骷基因表达差异。教中∈笫油ざ嗲蹦芨上赴騌分化的途径,建立一种无饲细胞层培养的小鼠分步诱导成母咝嘌逑怠方法笫油ざ嗲蹦芨上赴幕袢。喝〕跎天、鼠神经视网膜组织制成单细胞悬液,使用免疫磁珠分选的方法先行跣苑盅『行粜苑盅〉弥羖瓹赴海褂昧魇较赴际鹾拖胞免疫荧光法鉴定其具有极小胚胎样干细胞的特性。∈笫油ざ嗲蹦芨上赴团咛ジ上赴呐嘌河眯∈蟪上宋胞作为饲细胞层,神经干细胞培养基和胚胎干细胞完全培养基分别培养两种细胞,并观察形态特性。笈咛ジ上赴褪油ざ嗲蹦芨上赴癛的鉴定:采用碱性磷酸酶染色珹衐驟ǎ捎免疫组织化学方法检测小鼠视网膜多潜能干细胞;用方法检测全能性基因,,在小鼠,小鼠视网膜多潜能干细胞与小鼠錏的表达差异;甈检测小眼球相关转录因子猘酪氨酸酶琓⒗野彼崦赶喙氐鞍,⑹油ど厣掀は赴鞍琑谛∈驟油ざ嗲蹦芨上赴隦的表达差异。,.中文摘要博士学位论文
不表达谋昙切曰騇限、冲恍∈驟士∈驟胗盏疾腞基因表达差异性检测:小鼠无饲细胞层培养,并添加诱导因子进行天的诱导方案,、、基因表达差异,狿检测黾骸、谛∈驟隦的表达差异。∈笫油ざ嗲蹦芨上赴盅÷剩豪妹庖叽胖榉盅〉姆椒ù新生小鼠神经视网膜组织中分离出细胞群,细胞计数分选得率为%。,形态呈小圆形,核质比高。笫油ざ嗲蹦芨