文档介绍：华中科技大学
硕士学位论文
C57BL/6小鼠乙型肝炎病毒感染模型中细胞因子研究
姓名:袁璐
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:沈关心
2011-01
1
华中科技大学硕士学位论文
C57BL/6 小鼠乙型肝炎病毒感染模型中细胞因子研究
中文摘要
背景与目的
建立 C57BL/6 小鼠乙型肝炎病毒 HBV 感染的动物模型,参考基因芯片结果,
检测模型肝组织中趋化因子 IL-18、Mig、IP-10、L19 及部
分急性期蛋白基因、免疫相关蛋白的基因表达差异,为进一步研究炎性因子在
HBV 感染中作用及其机制奠定基础。
实验方法
C57BL/6 小鼠 HBV 感染的动物模型:pBluescript-HBV 质粒转化超
级感受态细菌 DH5α,提取大量质粒,高压水动力法于小鼠尾静脉注射,建立感
染模型,同时设立空载对照组(pBluescript)动物模型。
4 天取模型动物外周血,ELISA 试剂盒检测外周血中 HBsAg 的表
达水平,验证感染模型是否成功建立,收取肝组织冻存。
,挑选感兴趣的差异表达趋化因子,设计引物。
Trizol 法提取肝组织总 RNA,逆转录为 cDNA,Real-time PCR 检测实验组和对
照组对应因子的基因拷贝数量,RT-PCR 凝胶电泳分析。
IP-10 进行检测。
结果
感染 C57BL/6 小鼠模型的建立:ELISA 检测尾静脉高压注射 HBV
C57BL/6 小鼠组 HBsAg 结果为阳性,表明通过尾静脉高压注射 HBV 感染
C57BL/6 小鼠模型建立成功。
感染 C57BL/6 小鼠模型肝组织趋化因子的表达:①Real-time PCR
2
2
华中科技大学硕士学位论文
检测结果表明,扩增曲线和溶解曲线良好,实验组与空载对照组相比,IL-18,
Mig,IP-10,r7 的表达均有不同程度的增高,以 IP-10 最为显
著;RT-PCR 扩增产物凝胶电泳可见特异引物扩增的条带,IP-10 相应条带最为明
显,结果表明实验组中上述趋化因子基因拷贝数有不同程度增加,与 Real-time
PCR 检测结果呈一致趋势;②免疫组织化学方法检测结果表明,实验组 IP-10 表
达增加。
感染 C57BL/6 小鼠模型肝组织免疫应答分子和急性蛋白分子的表
达:Real-time PCR 结果表明,扩增曲线和溶解曲线良好,与对照组相比,实验
组中急性期应答相关分子 Saa2 表达增高;RT-PCR 扩增产物电泳图与对照组比
较,实验组中热休克蛋白相关基因 Dnajc10、急性期应答相关因子 Saa2、固有免
疫应答分子 Masp1、以及抗凋亡因子 Vnn1 的表达均有不同程度增加。
结论
依据 ELISA 检测 HBsAg 结果表明,HBV 感染 C57BL/6 小鼠动物模型建立
成功。Real-time PCR 和 RT-PCR 均显示趋化因子 IL-18、Mig、IP-10、Cxcl12、
r7 在实验组有不同程度的增高;PCR 结果与免疫组织化学检测结果均
表明 IP-10 因子表达增加明显,提示 HBV 感染中趋化因子的表达不同程度增加,
以及免疫应答相关分子的表达均有不同程度的表达增加,其表达增高作用及其机
制尚待进一步研究。
关键词:乙型肝炎病毒;炎性因子;C57BL/6 小鼠动物模型
3
3
华中科技大学硕士学位论文
Cytokines in C57BL/6 Mice Model of Hepatitis B Virus Infection
ABSTRACT
Backgrounds and Objective
By establishing the C57BL/6 mice model of HBV infection and considering the
gene microarrays as the references, the differences in the expression of chemokines
such as IL-18,Mig,IP-10,R7 L19, as well as the partial genes
for acute phase proteins and immune-associated proteins were detected to further
study