pcr扩增目的基因（课堂ppt）.ppt

文档介绍：任务二:PCR扩增目的基因1一、实验目的1、掌握PCR扩增DNA的技术与原理2、学****PCR扩增仪的使用2二、实验原理聚合酶链式反应是一种体外DNA扩增技术,具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等特点。PCR工作原理类似于DNA的体内复制过程,是将待扩增的DN***段和与其两侧的已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸作为引物,引物序列将决定扩增序列片段的特异性和片段长度。3标准的PCR过程分为三步: (92℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA (37℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。 (72℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链。45三、实验仪器PCR扩增仪台式高速离心机移液器高压灭菌后的Eppendorf管()电泳仪6四、材料与试剂1、模板DNA():用牙签挑取单菌落悬浮到50μL的裂解液中(1%TritonX-100,20mmol/LTris-,2mmol/LEDTA),95℃温浴10min,10000r/min离心5min,取2μL上清液用于总体积50μL的PCR反应。72、TaqDNA聚合酶(5U/μL),10×扩增缓冲液,dNTP(1mmol/L):购买。3、引物(100pmol/L):设计并合成与目的DNA两侧互补的引物。8五、(1)××(10ng)()加水至V终=100μL9(2)手指轻弹Eppendorf管底部离心2s(3)加石蜡油50μL封住溶液表面10