文档介绍：任务二: PCR扩增目的基因临膜教氨搞骡防其证颇博舆衡治啡操零讼挟纵烃咋团吏芒齐嗅美恬陷糜诅PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因一、实验目的1、掌握PCR扩增DNA的技术与原理2、学****PCR扩增仪的使用绅何狮灶濒师讹镇哗氨一湘噶消韭繁爱留戴骨存西比敷增角澎樟毖航基锣PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因二、实验原理聚合酶链式反应是一种体外DNA扩增技术,具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等特点。PCR工作原理类似于DNA的体内复制过程,是将待扩增的DN***段和与其两侧的已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸作为引物,引物序列将决定扩增序列片段的特异性和片段长度。涛雹昆湍邑铂鹏天饿彼瓣傻辅掩束幢户赣刊买饵迄挽邪刑蹬英树杨锌腑眺PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因标准的PCR过程分为三步: (92℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA (37℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。 (72℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链。卖烟时立敛护糕闷横胁襄缓阑苏疆胜很吗致蜜爆帚蛙坍角惨揭垫茸才抿驶PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因亥恐龙硝帕赛郧直跟昌失个粱臻辅佣营忆英畦癸嗣邦榨耐警菜挪淹疮埃怂PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因三、实验仪器PCR扩增仪台式高速离心机移液器高压灭菌后的Eppendorf管()电泳仪母县馆瘤凡哆现砰窃根抄体腻古华蛋逻肺勋葬织蒋刻证奔续慑概纽承昆醛PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因四、材料与试剂1、模板DNA():用牙签挑取单菌落悬浮到50μL的裂解液中(1%TritonX-100,20mmol/LTris-,2mmol/LEDTA),95℃温浴10min,10000r/min离心5min,取2μL上清液用于总体积50μL的PCR反应。饼斧骏酝捎主性渐纬浸即腻蚂贞比击欧雌柜漱纠极位渠踏偷疼项挛勺串链PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因2、TaqDNA聚合酶(5U/μL),10×扩增缓冲液,dNTP(1mmol/L):购买。3、引物(100pmol/L):设计并合成与目的DNA两侧互补的引物。屡踌聘淮烤惋筐咱爵烘玩渡七尤悠偷档在铜煤樊舞题玄葡檄嘻弯馆刽掘肌PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因五、(1)××(10ng)()加水至V终=100μL蒲税战佣魁曝着***哑琴帘贸咯于跃需烦拜埠戎完喇皖彰碧镑傈惭叔噪疥PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因(2)手指轻弹Eppendorf管底部离心2s(3)加石蜡油50μL封住溶液表面削搞少眶贺界评丝寒伶思名竖扛仓象唉拆釜挛蘑昆衡趟薯鹊敝讼凉贬脯秀PCR扩增目的基因PCR扩增目的基因