文档介绍：实验酵母菌RNA的提取、鉴定及定童测定实验目的掌握稀碱(NaOH)法分离酵母RNA的原理与方法了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。实验原理)目前常用的RNA的制备方法浓盐法:是用高浓度盐溶液处理,同时加热,以改变细胞壁的通透性,使核酸从细胞内释放出来。成本低、适于大规模操作。稀碱法:是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA。提取的RNA有不同程度的降解。稀碱法的提取时间短,提取率高于浓盐法,更利于工业化生产二)实验材料的选择酵母细胞富含核酸,且核酸主要是RNA,含量为千菌体的267%-%,而DNA含量较少,仅为003%-0516%。为此是取RNA多以酵母为原料)RNA的化学组成的鉴定(1)嘌岭碱鉴定:与硝酸银作用产生白色的嘌呤银化合物沉淀。(2)核糖的鉴定:地衣酚(3,5—二羟甲苯试剂)显色法(3)磷酸的鉴定:与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵沉淀[(NH3PO212Moo3。4)脱氧核糖的鉴定:与二苯胺试剂反应生成蓝灰色沉淀,如没有沉淀产生,。。。%乙醇。%硫酸。。(3,5—二羟甲苯试剂):取比重19Hc100ml,加入FeCl36H20100mg及二羟甲苯100mg,混匀溶解后,置子棕色瓶中,此试剂必须在临用前新鲜配制。市售的3,5—二羟甲苯不能使用,必须用苯纯化结晶~2次,:%钼酸铵溶液:20m水溶解25克钼酸铵,加5mo/LH2S0430m,用水稀释至00m,%抗坏血酸(g)溶液:10g拉坯血酸洛于100m水2贮棕色瓶中。溶液宝淡黄色尚可用,如呈深黄色即失效。11·苯胶试剂:称取159二苯胶(如不纯须在70%之醇中重结晶2次),溶子1100m冰醋在操量中N深角5m匀淀(酸铵,过氯酸试剂):025%%过氯酸中如配200m,即在93m水中加入7m170%过氯酸和05g钼酸铵。四、操作步骤核酸的提取:,放入试管沸水浴加热30分钟,并经常搅拌。待冷却后加入乙酸5~8滴,使提取液呈酸性陌蕊试纸),移在离心管里,离心10分钟(3500转/分)将上清液倒人另一离心管中,加入95%乙醇2m,边加边搅。加毕,离心10分钟,即可得到核酸钠的白色沉淀。2核酸的水解:在含有核酸钠的离心管中加入5%硫酸2m,用玻棒搅匀,沸水浴煮10分钟。其中1m水解液放进EP管里,贴好标签冷冻保存(下次试验用)