文档介绍：扬州大学
博士学位论文
MDV-1 CVI988疫苗株VP22及UL13蛋白功能初步研究
姓名:张晨飞
申请学位级别:博士
专业:预防兽医学
指导教师:秦爱建
20090501
疫苗株及蛋白功能初步研究摘要血清吐砹⒖耸喜〔《讹旭七§如蠵研究生:张晨飞基因和觇,蚍直鸷偷ゴ筐逭畈《綢型的眦及比毫嘶蛲矗髯员嗦导师:秦爱建琈纳蚵甐T艘煸吹鞍椎难芯大小约.①大小的蛋白,在中,这两种蛋白均为主要的被及的研究相对较少,究竟索该蛋白作为蛋白转运工具的可行性,本研究构建了埘吖、位情况,从而评价对这值鞍椎淖T四芰Α=峁⑾諫、及在与融合表达的状态下能够被高效转运,而对膜蛋白。被发现在不存在其他病毒蛋白的情况下具备蛋白转导的功能,并且目前已经有很多研究表明能够转运其它蛋白在细胞间扩散,使其在克服基因治疗和基因免疫的缺陷方面具有得天独厚的优势。而作为病毒自身编码的丝/苏氨酸蛋白激酶,在病毒复制、组装、以及调节宿主细胞转录翻译方面发挥着重要作用。在校琕荱闹饕2《镜鞍椎孜铮⑶矣醒芯糠⑾諺的磷酸化可能影响该蛋白的定位,而在谢刮从欣嗨票ǖ馈目前关于是否也能作为蛋白转运的工具钟心男┑鞍啄芄槐桓玫鞍鬃T的转运功能是否能够增强机体针对目的蛋白的免疫应答水平淖5继匦杂秩绾在校琔欠衲芄涣姿峄疺该磷酸化修饰对又有何影响庑都需要进一步的实验进行探索。本研究旨在通过对上述问题的探索,为进一步走向应用打好基础。具有独立的蛋白转导功能,能够在细胞间高效转导,,并将所获得的重组质粒在上进行瞬时表达以观察上述不同融合蛋白在细胞上的定,淞疫苗株及蛋白功能初步研究张晨飞:
艏印吖以及瓼等蛋白,为进一步评价对这几种蛋白的免疫甐銮炕逭攵阅康目乖庖哂Υ鹚降钠兰转导机制的研究的转运效率较低,ú痪弑缸T四芰Α4送猓籚T撕蟮蛋白具备蛋白转运的功能,能够转运与融合表达的增强效果,本研究将猇荆甐皃甐闹刈楸泶锶诤系鞍的质粒免疫/∈螅免后采取小鼠血清并分离小鼠淋巴细胞,通过约傲魇较赴ḿ觳飧髯樾∈蟮拿庖哂Υ鹚剑峁⑾郑瑅芄惶异性增强沟南赴庖咚剑云涮逡好庖呙挥卸啻蟮挠跋臁O喾矗琋蛋白的体液免疫水平却显著增强,但细胞免疫增强的效果不明显。而对于鞍祝机体针对目的抗原的免疫应答的功能,但免疫应答的类型可能会受到蛋白转蛋白具有独立的蛋白转导功能,能够作为蛋白转运的工具,但其转导及细胞定位的机制还未确定。我们早期的研究发现,在腥镜腃中,定位于细胞核,为进一步研究该蛋白的转导机制及细胞定位机理,分析该蛋白在表达过程中细胞定位的影响因素,本研究通过重组人腺病毒表达蛋白,并对重组病毒表达的的转导功能进行鉴定,。进一步鉴定的细随后以特殊的荧光粒子的形式散在于胞浆中,;同时我们也对猼瓸杆状病究,发现该系统表达的也具有蛋白转导的功能,并且其定位可能受到温度的影响,而瞬时表达的的转导是细胞广谱性的,能够在多种细胞上实现蛋白转蛋白均定位在细胞核内。这些研究结果说明能够作为蛋白转运的载体,但对所转运蛋白具有选择性,并且能够改变被转运蛋白原始的细胞定位。几乎对其无任何的免疫增强的效果。上述结果显示,具备增强运方式的影响。胞定位发现,,并且定位在细胞核内。扬州大学博士学位论文
重组杆状病毒,命名为.。同时,利用√、,本研究通过砑腗觢功能对比煌局暌约安甎脑撕驼婧吮泶镆约岸嗫寡G宓闹票序列对比分析及对可能的磷酸化位点预测甅的高抗原性片段,进行原核表达,并以切胶免疫方法免疫小鼠制备多抗血清,再蛋白激酶是一类庞大的蛋白家族,尽管它们的结构、催化模式以及特异性底物都存在很大的差异,但它们的功能结构域却相当保守。是病毒编码的同疱疹病毒属的氨基酸序列,发现煌局甑腢蛄薪跸嗤而不同疱疹病毒属的及相应同源物的同源性很低,但在它们的激酶结构域内保守。通过软件绘制该蛋白的遗传分类图谱,发现它与黑腹果蝇的蛋白的功能结构域属于相同进化分支,利用δ芗焖鱉保守结构域,发现也具有丝/苏氨酸蛋白激酶的激酶结构域,并且催化中心主要位于氨基酸残基间,利用软件分析峁建立可能的结构模型,同时对比真核生物蛋白激酶的基序,发现在激酶鞯谋J馗拾彼岵谢凰堪彼崽娲琒Ⅷ的保守非极性脯氨酸残基被极性半胱氨酸残基替换。利用对进行磷酸化位点预测,发现该蛋白存在多个丝/苏氨酸磷酸化位点,且主要集中在两端,提示很有可能也是的磷酸化底物。蛋白是病毒自身编码的蛋白激酶,具有类似真核细胞蛋白激酶的功能,并且在整个疱疹病毒科内都具有保守性,为研究该蛋白激酶的功能,本研究通过