文档介绍：生物技术专业核心课程生物技术专业核心课程基因工程基因工程华东理工大学张惠展华东理工大学张惠展基因工程 5 2 3 4 1 6 7 8 9 重组 DNA 技术与基因工程的基本概念重组 DNA 技术与基因工程的基本概念重组 DNA 技术与基因工程的基本原理重组 DNA 技术与基因工程的基本原理重组 DNA 技术所需的基本条件重组 DNA 技术所需的基本条件重组 DNA 技术的操作过程重组 DNA 技术的操作过程目的基因的克隆与基因文库的构建目的基因的克隆与基因文库的构建外源基因在大肠杆菌中的表达外源基因在大肠杆菌中的表达外源基因在酵母菌中的表达外源基因在酵母菌中的表达外源基因在哺乳动物细胞中的表达外源基因在哺乳动物细胞中的表达外源基因表达产物的分离纯化外源基因表达产物的分离纯化 3 重组 DNA 技术所需的基本条件 3 重组 DNA 技术所需的基本条件 C 用于基因转移的受体菌或细胞 C 用于基因转移的受体菌或细胞 B 用于基因克隆的载体 B 用于基因克隆的载体 A 用于核酸操作的工具酶 A 用于核酸操作的工具酶 A 用于核酸操作的工具酶 A 用于核酸操作的工具酶 3 重组 DNA 技术所需的基本条件 3 重组 DNA 技术所需的基本条件限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 DNA 连接酶 DNA 连接酶 DNA 聚合酶 DNA 聚合酶核酸酶核酸酶核酸修饰酶核酸修饰酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶的发现及其生物功能限制性核酸内切酶的发现及其生物功能识别双链 DNA 分子中的特定序列,并切割 DNA 双链识别双链 DNA 分子中的特定序列,并切割 DNA 双链主要存在于原核细菌中,帮助细菌限制外来 DNA 的入侵主要存在于原核细菌中,帮助细菌限制外来 DNA 的入侵细菌的限制与修饰作用细菌的限制与修饰作用 hsd R :编码限制性核酸内切酶 hsd R : 编码限制性核酸内切酶 hsd M :编码限制性***化酶 hsd M : 编码限制性***化酶 hsd S :编码限制性酶和***化酶的协同表达 hsd S : 编码限制性酶和***化酶的协同表达 1968 年, Smith 等人首先从流感嗜血杆菌 d 株中分离出 1968 年, Smith 等人首先从流感嗜血杆菌 d 株中分离出 Hind II 和 Hind III Hind II 和 Hind III 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶的类型限制性核酸内切酶的类型主要特性 I 型 II 型 III 型主要特性 I 型 II 型 III 型限制修饰限制修饰多功能多功能单功能单功能双功能双功能蛋白结构蛋白结构异源三聚体异源三聚体同源二聚体同源二聚体异源二聚体异源二聚体辅助因子辅助因子 ATP Mg 2+ SAM ATP Mg 2+ SAM ATP Mg 2+ SAM ATP Mg 2+ SAM Mg 2+ Mg 2+ 识别序列识别序列 TGAN 8 TGCT TGAN 8 TGCT 旋转对称序列旋转对称序列 6 GTGC 6 GTGC CAGCAG CAGCAG 切割位点切割位点距识别序列 1kb 处距识别序列 1kb 处识别序列内或附近识别序列内或附近距识别序列下游距识别序列下游随机性切割随机性切割特异性切割特异性切割 24-26bp 处 24-26bp 处限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶的命名限制性核酸内切酶的命名属名 种名株名属名 种名株名 H i n d III H i n d III H i n d III H i n d III Haemophilus influenzae d 嗜血流感杆菌 d 株 H aemophilus in fluenzae d 嗜血流感杆菌 d 株同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 II 型限制性核酸内切酶的基本特性 II 型限制性核酸内切酶的基本特性识别双链 DNA 分子中 4 - 8 对碱基的特定序列识别双链 DNA 分子中 4 - 8 对碱基的特定序列大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构 5‘…G C T G A A T T C G A G … 3’5‘…G C T G A A T T C G A G … 3’ 3‘…C G A C T T A A G C T C … 5’3‘…C G A C T T A A G C T C … 5’ EcoR I 的识别序列 EcoR I 的识别序列 EcoR