文档介绍：检验医学年月第卷第. ·
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血清中的建立及初步临床试验
吴蓓颖, 倪培华。, 顾志冬, 樊绮诗
.上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科,上海;
.上海交通大学医学院检验系,上海
摘要:目的建立肿瘤蛋白诱导的糖酵解和凋亡的调控子的定量酶联免疫吸附试验
,并探讨血清中定量测定在肿瘤患者诊断中的临床应用。方法构建原核表达载体并
诱导蛋白表达,纯化蛋白后免疫家兔获得多克隆抗体,以此兔抗多克隆抗体为包被抗体,以生物素一辣根
过氧化物酶标记链霉亲和素—检测系统,建立定量检测的双抗体夹心。测定例肿瘤患
者及名对照者的血清含量,并探讨其与肿瘤的关系。结果建立的定量拟合曲线的相
关系数.,肿瘤患者血清含量高于对照组,差异有统计学意义:.,. 结论本
研究成功建立了定量,血清含量测定对某些肿瘤的研究和临床检测可能有一定价值。
关键词:肿瘤标志物;肿瘤蛋白诱导的糖酵解和凋亡的调控子;酶联免疫吸附试验
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在最新的研究中,肿瘤蛋白诱导的二磷酸酶相似的功能。在细胞中的
糖酵解和凋亡的调控子一高表达会降低,.二磷酸果糖水平,抑制糖酵解
,被描述为一个新的限速酶一磷酸果糖激酶.,抑制糖酵解。虽然
的可被诱导的调节糖酵解的蛋白。肿瘤细胞的糖酵解降低了,但的高表达却
是组氨酸酶超家族的成员,以组氨酸为核心,在后使磷酸戊糖途径作用增强,引起还原型烟酰胺腺
续的反应过程中被磷酸化,显示了在调节糖酵解、嘌呤二核苷酸磷酸增高,抑制引
细胞内活性氧类,水起的细胞凋亡,有利于肿瘤细胞的生长。我们
平和凋亡方面与一磷酸果糖激酶一及果糖一,一建立了定量酶联免疫吸附试验,
作者简介:吴蓓颖,女,年生,硕士,技师,主要从事分子遗传学及肿瘤分子生物学研究:
检验医学年月第卷第期
并测定肿瘤患者及对照者血清中含量,探分析等方法验证。
讨检测用于临床标本的可能性。.融合蛋白抗原的制备和纯化重
组质粒转化到
材料和方法
菌,培养过夜。取单个菌落经鉴定及
一
、材料酶切鉴定后,接种到培养基含卡那霉
.研究对象例肿瘤患者肺癌例、素/。振荡过夜,按:的比例
结肠癌例、胃癌例、胰腺癌例、直肠癌例接种到培养基中,℃培养至吸
及乳腺癌患者例,均经瑞金医院病理科诊断证光度。。.~.时,加入异丙基一—硫代
实,其中男例,女例。另取名健康人作半乳糖苷至终浓度为./,继续诱
为对照性别、年龄分布与肿瘤患者组相同。研导。用。方法纯化目的蛋白,用含有不
究对象的血清标本来自瑞金医院检验科血清库。同浓度咪唑的缓冲液一、一、
.试剂弗氏完全佐剂、生物素酯—、.、.洗脱,获得目
·美国公司,—的蛋白后,用生理盐水透析,并用聚乙二醇
试剂盒德国公司,兔抗组氨酸一浓缩蛋白,用试剂盒测定蛋白浓度。
抗体美国公司,
试剂盒碧云天生物技术公司,,按/只的
过氧化物酶—公司,四甲基联苯